花背蟾蜍早期发育实验指导

实验目的了解无尾两栖类的胚胎发育过程，加深感性认识。思考题与作业按表22-1要求写出实验报告并绘制花背蟾蜍早期发育图，以表22-2花背蟾蜍早期胚胎发育分期表为依据。

理论教育 2023-11-21

蛋白b-catenin在大鼠神经元发育中的影响

实验目的观察蛋白b-catenin对离体大鼠神经元树突发育的影响。实验原理b-catenin是wnt信号通路的重要组成成分，是包括大脑在内的生物体多个组织生长发育所必需的。钙转的特点之一是共转染效率很高，本实验在体外培养的大鼠海马神经元上共转染b-catenin和GFP，利用GFP标出神经元形态，观察b-catenin过表达对树突发育的影响。思考题与作业除了本实验提供的方法，你还可以用什么方法证明b-catenin对神经元的正常发育是必需的？

理论教育 2023-11-21

斑马鱼总RNA提取及cDNA制备

实验目的1.掌握斑马鱼RNA的提取。实验原理RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。总之，在所有RNA实验中，归根结底就是防止RNA酶的污染，分离到全长的RNA。其纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。实验程序1.总RNA的提取样品处理：斑马鱼整体胚胎提取时，收集30个胚胎。取3 μL总RNA于1%的琼脂糖凝胶上电泳检测。

理论教育 2023-11-21

常用染料配制步骤-发育生物学实验指导

乙液（染色剂）：苏木精0.5 g95%乙醇10 mL重蒸馏水90 mL将苏木精先溶于10 ml 95%乙醇中，慢慢倒入重蒸馏水中，瓶口用纱布扎紧置于有光处。约1个月后苏木精被氧化为深琥珀色即可使用。

理论教育 2023-11-21

生殖细胞发生与精子形态观察

精子形成于精巢，哺乳动物成熟的精子储存于附睾中，取其活体状态下附睾内精液，借助显微镜，即可观察到活体的精子形态。因此，在同一时间内，在曲细精管的不同部位，即由基膜向管腔排列依次为不同发育时期的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和分化中的精子。

理论教育 2023-11-21

斑马鱼胚胎显微注射实验

实验目的掌握胚胎显微注射技术。显微注射高效而快速，可在1 h内注射几百枚胚胎。检查显微手动操作装置的位置，以保证注射的方便。在注射后的当晚，弃去死亡的胚胎，并对注射过的胚胎进行计数。定期更换胚胎培养液以减少因感染而引起的胚胎死亡。24 hpf后，于荧光显微镜下，观察注射GFP质粒DNA后胚胎所发出的绿色荧光。

理论教育 2023-11-21

花发育中多糖与蛋白质在花芽的分布实验结果

实验目的1.了解糖类和蛋白质在花发育过程中的作用。一般认为生殖器官的发育比营养生长需更高的能量，碳水化合物与含氮物质在成花转变中及花发育过程中起着重要的作用。因此在有多糖的部位，就会呈现出紫红色阳性反应。

理论教育 2023-11-21

鸡胚的孵化及活体观察实验结果

实验目的1.掌握鸡胚人工孵化的基本知识及操作过程。精子进入后，第二极体排出，不久雄原核与雌原核融合成为合子，以后进行卵裂。鸡卵为端黄卵，卵裂仅在胚盘的表面进行。第四次卵裂后，形成8个中央细胞和8个以上的边缘细胞。实验程序1.鸡卵的孵化调温：鸡孵化的适宜温度为38～40℃，最适温度39℃，在进蛋前须将孵卵箱的温度调至适宜范围，并稳定观察2～3 d。心脏发生扭曲，位于胚体的腹前方，并占有显要位置。

理论教育 2023-11-21

斑马鱼视觉系统中神经丝蛋白的免疫组织化学定位

实验目的1.通过实验操作，了解免疫组织化学实验的原理和步骤。许多实验证据表明低分子量的神经丝蛋白在视觉组织早期的正常发育和轴突损伤再生过程中起了重要的作用。有大量资料显示许多低分子量神经丝蛋白都在视觉轴突中有表达，它们的表达与轴突的生长发育有密切的关系。

理论教育 2023-11-21

拟南芥花发育中基因的表达与定位：RNA原位杂交技术分析

实验目的1.掌握原位杂交的基本原理。与此同时，Buongiorno-Nardelli和Amaldi、John及其同事相继利用同位素标记核酸探针进行了细胞或组织的基因定位，从而创立了原位杂交技术。这一技术为研究组织和细胞中编码各种蛋白质和多肽相应mRNA的定位与定量提供了手段。因此，RNA原位杂交技术成为了在组织水平分析基因的表达和功能的有效方法。实验材料1.材料：拟南芥不同发育阶段的花芽。

理论教育 2023-11-21

发育生物学实验指导书：常用显色液配制

阳性反应呈棕色。DAB具有致癌作用，操作时一定要戴手套。混匀后即可用于碱性磷酸酶的酶促反应显色。阳性反应呈蓝紫色沉淀。由于4-氯-1-萘酚溶于乙醇，故勿用乙醇脱水。

理论教育 2023-11-21

斑马鱼胚胎发育实验结果

实验目的了解斑马鱼的早期发育过程。实验原理斑马鱼胚胎发育的最重要的特点之一是迅速。斑马鱼的胚胎发育既有普通硬骨鱼胚胎发育的一般特点，即经过受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、三胚层分化及出膜等时期,也有其自身的独特之处。实验程序通过自然受精法或人工授精法获得斑马鱼受精卵。根据Kimmel等的经典分期法，可以将斑马鱼的胚胎发育大致分为七个时期。

理论教育 2023-11-21

拟南芥花发育中基因表达的RT-PCR技术分析

实验目的1.能利用RT-PCR技术分析植物花发育中某些基因在RNA水平的表达情况。实验原理逆转录聚合酶链式反应RT-PCR是一种简单、能快速分析基因表达情况的实验方法，尤其是在可获得的mRNA数量有限和基因表达水平很低时即可用RT-PCR来分析。因此利用RT-PCR定量的方法可研究开花诱导基因及与花发育相关基因的表达情况。人们把拟南芥的花器官分为4轮。实验用品1.材料：拟南芥不同发育阶段的花芽以及相应时期的嫩叶。

理论教育 2023-11-21

光周期与赤霉素对植物开花的影响-实验结果

实验目的1.理解光周期对植物花诱导的影响。实验原理20世纪早期，研究者发现开花通常受光周期或光照长度的控制。科学家发现，光周期可以调节多种植物开花，因此就有了光周期现象。多效唑是植物内源GAs合成的抑制剂，对一些长日照植物的开花诱导具有抑制作用。观察光照周期即长日照、短日照和连续光照对开花时间与莲座叶数的影响；观察赤霉素与多效唑对拟南芥开花时间与莲座叶数的影响。

理论教育 2023-11-21

斑马鱼视神经再生中神经丝蛋白的Westernblot分析

许多实验证据表明低分子量的神经丝蛋白在视觉组织早期的正常发育和轴突损伤再生过程中起了重要的作用。在鱼类中研究证实，低分子量神经丝蛋白Plasticin和Gefiltin在金鱼和斑马鱼视神经损伤后节细胞中有表达，说明它们与视神经损伤后轴突的阶段性生长有关。

理论教育 2023-11-21

斑马鱼卵母细胞发育观察实验结果

实验目的掌握斑马鱼卵母细胞的发育分期。在有性生殖中，精子和卵母细胞结合形成受精卵，最后发育成生物体。卵母细胞体积进一步增大，卵母细胞外周的皮质区出现许多小泡。实验注意事项1.镊子分离时，应小心避免对卵母细胞的损伤。

理论教育 2023-11-21