刷牙杯细菌污染及菌相分析

楼芳芳　周瑾茹　窦文超　赵广英

（浙江工商大学 食品与生物工程学院，浙江杭州310012）

［摘 要］ 为了解刷牙杯中细菌滋生情况及可能对人体健康带来的威胁，随机抽取28个刷牙杯，用国标方法进行细菌污染情况及污染菌相检测，结果显示：28只刷牙杯中的细菌菌落总数平均在109／cm2，其中大肠菌群为优势菌，还含有金黄色葡萄球菌等10种以上细菌和真菌。由此可知，刷牙杯极易滋生微生物，对人体健康潜在威胁巨大，因此应引起人们高度重视，同时提出了对刷牙杯进行正确选择、放置和采取经常的清洗、消毒等措施，尽最大可能减少与避免其微生物的污染和滋生，以有效减少和消除健康威胁，防患于未然，保证健康。

［关键词］ 刷牙杯；菌落总数；大肠菌群数；菌相分析

Bactenia Contamination of Tooth Cups And Its Strain Analysis

Lou Fangfang Zhou Jinru Dou Wenchao Zhaoguangying

（College of Food Science and Biotechnology，Zhejianggongshang University，Hangzhou Zhejiang 310012，China）

Abstract：In order to know the contamination and breeding of bacteria in tooth cups，we randomly chose 28 tooth cups and used thegB methods to detect the number and type of the bacteria in those tooth cups．The results showed that the average number of bacteria in the 28 tooth cups was 109 cfu／cm2，the major type of bacteria detected in the tooch cups was coliforms，and more than 10 kinds of other bacteria were also detected，Such as Staphylococcus aureus，which could cause prodigious harm to people’s health．People could effectively reduce and eliminate this threat by choosing the right cups，placing and cleaning the cups in the right ways and disinfecting．The bacterial pollution of the tooth cups are easy to be ignored．In order to effectively reduce and eliminate this threat，people should pay high attention to these problems and carry out the appropriate methods to reduce and avoid the breeding of bacteria on tooth cup．

Key words：Tooth cups；Aerobic plate count；Contamination

刷牙杯是我们生活中不可缺少的一部分。一天中，我们至少会接触它2次，有的人达五六次之多。然而有多少人会想到选择什么样的刷牙杯更卫生？间隔多长时间清洗1次刷牙杯？或者说有多少人是真正把刷牙杯清洗干净的？实际上很少有人会认真地对待这件事。然而，刷牙杯中特别是其底部含有大量细菌、病毒和真菌等微生物，如果温度和湿度适宜，就会大量繁殖，有的甚至在杯底结了较厚的一层黏腻污垢，这样刷牙杯就成了藏污纳垢的场所，非但不能帮助清洁口腔、健美牙齿，反而成为了传染疾病的媒介或诱发牙龈炎、肠炎、牙周炎等疾病的病源。刷牙杯中到底有多少细菌等微生物？其主要种类、主要来源及潜在致病危害如何？采取什么措施可避免和减少此类污染和危害？这些问题目前尚未见确切系统的报道。本研究对一定数量刷牙杯进行了细菌菌落总数和大肠菌群数的测定，并进行了主要种类细菌的菌相检测及污染菌来源和潜在危害的分析，据此，提出了减少和消除刷牙杯微生物污染与滋生的方法和措施，以引起人们的重视，对提高群众的卫生素质、培养良好的卫生习惯、促进全民健康具有较普遍的实际意义。

1．　材料与方法

1．1　材料

1．1．1 仪器：数显恒温水浴锅：H H－6型，国华电器有限公司制造；隔水式恒温培养箱：GRP－9080型，上海森信实验仪器有限公司制造；立式压力蒸汽灭菌器：BXM－30R型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂制造；超净工作台：SWCJ－1BU，单人单面净化工作台，苏州净化设备优先公司制造；电热恒温培养箱：S．C．303－4型，浙江省嘉兴市新塍电器厂制造；光学显微镜：CX21FS型OLYMPUS CORPORATION TOKYO，JAPAN。

1．1．2 试剂和培养基。

LST肉汤，杭州微生物试剂有限公司配制；BGLB肉汤，杭州微生物试剂有限公司配制；氯化钠，蒸馏水；革兰氏染色液体：革兰氏结晶紫、稳定革兰氏碘液、革兰氏脱色剂、革兰氏番红精；因为没有相关的检测标准，本研究主要参照食品微生物学检测现行相关国标进行配制：0．85%氯化钠生理盐水150mL，按GB4789．2— 2010配制灭菌，取样时用；平板计数琼脂，按GB4789．2—2010配制，用烧杯配好平板计数琼脂500mL；Baird－park平板．血平板，按GB4789．10—2010配制。

1．1．3 样品取样时间为5月，样品为28个刷牙杯。操作时尽量无菌，并注意做到快速采样和迅速进行后续检测工作。

1．2　检验方法

1．2．1 准备工作。

1．2．1．1 各种玻璃或塑料仪器洗净、培养皿晾干或烘干后，1mL和5mL枪头，离心管60支。剪刀，镊子用纸包好，竹棉签则先用白色的纸包好后再外面包层牛皮纸。500mL的琼脂培养液，分装到2个锥形瓶中，150mL生理盐水也装在一个锥形瓶中。接着把所有的这些器具放进湿热灭菌锅进行高温灭菌。

1．2．1．2 用常规紫外线消毒后进行无菌操作，从锥形瓶中用移液枪取1．2mL灭菌生理盐水到10mL离心管内，按取样数量准备个数，如一次取6个样就准备6只，另备取样个数9倍数量的装有9mL灭菌生理盐水的离心管作为稀释管，外加2支补充备用。

1．2．2 取样。

灭菌棉签在无菌生理盐水中浸湿，对一个刷牙杯底进行取样，顺时针旋转5次以上，尽量擦净刷牙杯底部，而后将棉签头用灭菌剪刀剪掉至装有1．2mL无菌生理盐水的10mL离心管中，尽快带回实验室备检查。

1．2．3 样品处理。

装样离心管在振荡仪上振荡1分钟将棉签上的菌震荡洗下，再用灭菌镊子将棉签头中的水挤出来后丢弃。

1．2．4 样品稀释及菌落总数测定和大肠菌群计数。

1．2．4．1 用移液枪分别从样品管中取出1mL样品放入之前准备好的稀释管中，进行梯度稀释，在稀释梯度为10－7，10－8和10－9的管中分别取出1mL加到灭菌平板中，再加入冷却至46℃的15mL—20mL平板计数培养基中，轻轻混匀，37℃培养48小时后进行菌落总数测定，同时做空白对照，计数每个刷牙杯中的菌落总数。平行3次。从10－3，10－4，10－5取出1ml接种到LST肉汤，每个梯度3支，置37℃培养48小时，再转接种到复发酵管中，进行大肠菌群计数。

1．2．4．2 按照食品微生物学检测现行国标法对样品进行金黄色葡萄球菌检测。

1．2．5 革兰氏鉴别阴性阳性菌。

平板长出菌落后，挑取单菌落进行革兰氏染色，对细菌进行革兰氏阳性和阴性分类。

1．2．6 平板培养。

在普通计数平板上倒上10－4样品稀释液0．1mL涂布均匀，37℃培养48小时后在室温培养2—3天，观察菌落、拍照。

1．2．7 重复操作。

由于检测过程的工作量比较大，为能够对所采样品进行尽快检测，以保证检测结果更加准确，因此进行分批采样检测，每批采、做5—6个样，一批做完后再采、做另一批，总共5批28个样品。

2．　结果与分析

2．1　按现行食品安全国家标准食品微生物学检验:

菌落总数测定法对这28只刷牙杯进行菌落总数测定，结果如表2－1所示：

表2－1　1－28号刷牙杯中每1mL样品中所含菌落数目

由表2－1可见，每个刷牙杯中的细菌总数在4×107—1．0×1010之间，平均数量级为109（即为数十亿个）。其实，一个刷牙杯中所含的细菌数量远不止此，因为一是样品刷牙杯来源于平时比较讲卫生、居住环境条件也比较干净的人员的刷牙杯，且他们基本都有定期清洗刷牙杯的习惯，刷牙杯中基本没有肉眼可见的明显的污物，如果源于其他人群且环境条件不是很好的样品，特别是刷牙杯底部有黏腻的无色、白色、黄色或灰黄黑色污垢的刷牙杯，其细菌数量会更加多的惊人；二是使用任何一种细菌计数方法也只能计数其中的一部分，还有一部分细菌在此条件下不能或还没有来得及生长而未被计数出来；三是所取得的样品也只是杯底而非整杯全部；四是除了可以计数的细菌外，尚可能有病毒、真菌和原虫等微生物没有计数。由此可见，刷牙杯中污染和滋生的微生物的数量确实是多的令人震惊。

刷牙杯中如此多的细菌从何而来？分析认为：一是源于刷牙后的残留物，二是源于开口杯暴露于空气中，三是已有细菌在杯中的大量繁殖。因为口腔中有大量细菌，特别是在清晨睡醒后口腔中的细菌数量是全天中最多的，（很多人疑惑清晨起床后是先喝水还是先刷牙，应该是先刷牙，最起码是先漱口，后喝水），刷牙时难免污染刷牙杯，饭后刷牙残留的饭渣会成为细菌很好的营养基质，且很多人习惯刷完牙后不清洗牙刷，直接将牙刷刷头一端放入杯中，造成细菌污染和大量滋生；再有，目前所用刷牙杯普遍为开口杯，没有盖子，直接暴露于空气中，且刷牙杯平时或放于寝室中或放于卫生间中，其空气质量相对都不好，特别是温暖的地域和季节，更易于细菌的污染和繁殖；放置于卫生间中的刷牙杯更易于被粪便、尿液和马桶中的细菌所污染，有人研究，冲马桶时急速冲刷出来的水激起的微小飞沫数量非常大，并可上升高达数米，飘散在卫生间内，很易于落入敞口的刷牙杯中，由此分析，刷牙杯可成为粪便、尿液和马桶中微生物包括致病微生物的重要传播媒介；冲马桶的最好方法是盖上马桶盖子后再放水，避免激起含有尿液、粪便的飞沫污染空气。

2．2　细菌菌相

将样品原液不断地稀释到10－4，取0．1ml涂布在琼脂平板上，在37℃恒温箱中培养2天，再于室温中（20～25℃）放置2—3天，用肉眼和放大镜观察菌落特征。因不同种类的细菌可有不同的菌落形态学特点。由图2－1可以清晰地看到刷牙杯中污染和滋生的细菌种类之多，其菌落的形态、质地、大小、结构和颜色各异，初步观察、分析判断认为刷牙杯中污染微生物种类在10种以上。

图2－1　刷牙杯样品10－4稀释液培养结果

2．3　大肠菌群测定和计数(www.daowen.com)

用国标法进行大肠菌群（coliforms）测定和计数证实了大肠菌群的存在，并初步得出其数量级在105以上，从而证实它是优势菌群。大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。一般认为该菌群细菌包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。在食品中检测大肠菌群是因为该类菌主要来源于人和温血动物粪便，以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌如霍乱、伤寒、痢疾等的可能。

2．4　金黄色葡萄球菌检测

按照国标法进行金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）检测，证实有一定量金黄色葡萄球菌的存在。分析认为金黄色葡萄球菌主要来源于空气，含量比较多的原因是因为该菌来源广泛、对环境耐受力强、个体微小易于分散，因此是空气中分布较广、较多的一种细菌，随空气流动污染刷牙杯。有些金黄色葡萄球菌可经污染的刷牙杯引起人体局部感染，如牙龈炎、口腔炎、咽喉炎、上呼吸道感染、肺炎和胃肠炎等，严重者可引起化脓性感染、全身感染、败血症、脓毒血症等，对人的直接或潜在危害性比较大。因此揭示牙杯中该菌污染情况对于督促人们经常清洗刷牙杯有警示作用。

2．5　革兰氏染色和形态学观察

将平板计数板琼脂上的菌落挑取进行革兰氏染色和菌体形态观察。在光学显微镜下观察发现有革兰氏阴性的中小杆菌、球杆菌和革兰氏阳性的不同大小和不同连接方式的球菌及大肠杆菌。

2．6　刷牙杯污染分析

刷牙杯样品来源较清洁，但其中细菌含量还是较多，如果样品来源较差，其细菌含量恐怕更多。

本次所测样品源于大环境气候较好的地域，小环境也不差的房间中，取样时间为5月，天气较温暖但不是很热，还不是最有益于细菌繁殖的时节，检测出来的细菌较多；如果样品源于大环境气候不好的地域和小环境条件不好的房间如农民工寝室或卫生间，取样时间是在气温较高的夏天，其样品中所含细菌的数量可能会更多。

3　减少刷牙杯中细菌污染和消除感染隐患的有效措施

3．1　刷牙杯的选择

最好选用矮粗且带盖并有专门放置牙刷和牙膏格的专用刷牙杯。有些人使用敞口且细高的刷牙杯，既容易被空气中微生物和灰尘污染，同时也很不方便清洗，特别是杯底，必要时还需借助清洁布和镊子等工具帮助清洗杯底，清洗不便也容易造成更多的污染。因此，最好选用较矮粗且带盖牙杯既方便彻底清洗，还可以在刷完牙后盖上盖子，避免空气中细菌地落入，减少污染。如果不是带盖的杯子，用完控净水后侧挂起来，以减少空气中污物直接落入杯中的概率。

3．2　清洗刷牙杯

清洗刷牙杯是保持刷牙杯干净最有效的方法，有些人间隔数日才清洗一次，大多数人刷完牙后只进行简单的冲洗，牙刷也随便扔进杯中，甚至匆忙中连牙杯中的水都未倒干净，实际上这些都是不好的习惯；另外，很多人只进行简单的冲洗，实际上作用不大。正确的方法是在刷牙前先洗净手，再用手清洗刷牙杯的内侧和外侧，最后以流水彻底冲干净后再使用；刷完牙后再次洗净杯子，包括接触过嘴的部位并将水倒净，残留的水会利于微生物的生长；牙刷也要细心清洗后刷头朝上放，最好放置通风干燥处，减少细菌污染和繁殖，如果有单独放置牙刷的地方更好。刷牙杯的简单清洗方法是用洗奶瓶的刷子加上洗洁精仔细刷洗；或用清洁布（球、餐巾纸捏成团）沾上洗洁精、牙膏擦洗（有人用食盐，易将杯子擦出划痕；有人用洗衣粉或洗衣膏，有毒不能用），擦不到的地方用镊子或筷子抵住擦洗，最后用流水冲洗干净，并控净水分。无论用哪种方法清洗，都要仔细，特别是杯底边缘部位更要清洗干净。

3．3　刷牙杯的消毒

即用理化方法杀灭微生物，主要是致病微生物。几种方便适用的消毒方法如下。

3．3．1　食醋法：在清洗后的牙杯中加入食用醋，浸泡20分钟后再用细刷洗，特别是杯底边缘。

3．3．2　酒精法：对清洗后的牙杯用75%酒精棉球仔细擦洗。

3．3．3　84消毒液法：84消毒液原液按照1∶9的比例兑水放于刷牙杯中，盖上盖子浸泡20—30分钟，倒掉（不要用手直接接触此浓度的消毒液）后用水洗净即可。

3．3．4　煮沸法：将清洗后的刷牙杯煮沸10分钟即可。刷牙杯消毒间隔时间可根据平时清洗、环境卫生、杯子污染等状况而定，可以一周至两个月不等。

3．4　刷牙杯的更换

有人建议3—6个月更换一次，实际上刷牙杯清洗和消毒比更换更有意义，即使是新刷牙杯如不清洗，2—3天后也会有大量细菌生长；牙刷也是如此，清洗干净可以延长使用寿命，节能环保。

3．5　不用刷牙杯直接用手接水刷牙

有些人特别是部分年轻人，即知道应该经常清洗和消毒刷牙杯，但感觉这样做比较麻烦，所以索性不用刷牙杯，而是将手洗干净后直接用手接水刷牙，就这样也是可以的，但有个前提就是必须把手彻底洗干净后才行。

4．　结 论

通过对28个刷牙杯所取样本进行细菌菌落总数、大肠菌群数、金黄色葡萄球菌检测和菌相分析，检测结果为每个刷牙杯中的细菌菌落总数在4．0×107—1．0×1010之间，平均数量级为109，即为数十亿个，因受取样和检测条件等因素的影响，实际含量要远远大于这个数据；每个刷牙杯样品的大肠菌群含量在105以上，是优势菌群；含有一定量的金黄色葡萄球菌；所含细菌种类较多，可达10种以上。由此可见，不洁刷牙杯对人体健康存在较大威胁，是潜在的人体多种感染的重要媒介体。减少和避免刷牙杯中细菌污染和消除感染隐患的有效措施是选择合适的刷牙杯，用后采用合理的放置方法，进行认真和正确的常规清洗、消毒和更换。要做到这些看似麻烦，实际操作简单快捷，但贵在持之以恒。养成良好的卫生习惯，防患于未然，保持清洁有益于健康长寿！

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