（1）样品的制备

①植物油的乙酯化。

取样品80 μL 于具塞刻度试管（5 或10 mL）中，加0.5 mol/L 氢氧化钠乙醇1 mL，充氮气，加塞，于50 ℃水浴中振摇至小油滴完全消失（为8 ～10 min）；加三氟化硼乙醇液1.5 mL，混匀，于50 ℃水浴中放置5 min，取出冷却；加正庚烷1 mL、饱和氯化钠液2 mL，振摇混匀，静置分层，取上层正庚烷液于另一具塞试管中；加少量无水硫酸钠，充氮气，于4 ℃冰箱放置，待GC分析。

②薄层色谱法检查乙酯化程度。

取上述乙酯化样品5 μL，点于硅胶G 薄层板（20 cm×5 cm，110 ℃活化）上，用石油醚（沸程30～36 ℃）∶乙醚=90∶10展开，然后喷涂0.02%若丹明乙醇液，于紫外灯下观察，脂肪酸、甘油三酯和脂肪酸甲酯的R值依次增大。脂肪酸和甘油三酯点的消失，说明乙酯化反应完全。

（2）样品的净化

准确移取5 mL 的待净化滤液至固相萃取柱（SPE）中。再用3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗，弃淋洗液，抽近干后用3 mL氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，50 ℃下氮气吹干。

（3）样品的衍生化

取上述氮气吹干残留物，加入600 μL的吡啶和200 μL衍生化试剂［N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+三甲基氯硅烷（TMCS）（99+1），色谱纯］，混匀，70 ℃反应30 min 后，供气相色谱-质谱联用法定量检测或确证。

（4）色谱条件

①色谱柱：PEG-20M石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）。

②流速：1.0 mL/min。

③程序升温：40 ℃保持1min，以10 ℃/min的速率升温至200 ℃，保持5 min，再以30 ℃/min的速率升温至210 ℃，保持2 min。

④载气：氮气；柱前压3.0 kPa；分流比为1∶30。

⑤进样口温度：250 ℃。

⑥进样方式：分流进样。(www.daowen.com)

⑦进样量：1 μL。

（5）质谱条件

①电离方式：电子轰击电离。

②电离能量：70 eV。

③离子源温度：250 ℃。

④质量扫描范围：350 AmU/s。

（6）结果计算

直接从标准曲线上读出试样中不饱和脂肪酸的浓度，代入计算

式中X：试样中不饱和脂肪酸含量，g/kg；

ct：从标准曲线上读取的试样溶液中不饱和脂肪酸浓度，μg/mL；

cb：从标准曲线上读取的空白溶液中不饱和脂肪酸浓度，μg/mL；

V：试样溶液定容后的体积，mL；

m：试样的质量，g；

f：试溶液的稀释因子。