理论教育 发育生物学实验指导书:常用显色液配制

发育生物学实验指导书:常用显色液配制

时间:2023-11-21 理论教育 版权反馈
【摘要】:阳性反应呈棕色。DAB具有致癌作用,操作时一定要戴手套。混匀后即可用于碱性磷酸酶的酶促反应显色。阳性反应呈蓝紫色沉淀。由于4-氯-1-萘酚溶于乙醇,故勿用乙醇脱水。

发育生物学实验指导书:常用显色液配制

1.DAB/H2O2显色液

DAB(3'-3'-二氨基联苯胺-4盐酸盐) 50 mg

0.05 mol/L Tris-HCl(pH 7.6) 100 mL

30% H2O2 30~40 μL

先以少量0.05 mol/L Tris-HCl(pH7.6)溶解DAB,然后加入余量Tris-HCl,充分摇匀,使DAB的终浓度为0.05%,过滤后显色前加入30~40 μL 30% H2O2,使其终浓度为0.01%。阳性反应呈棕色。分装-20℃保存。DAB具有致癌作用,操作时一定要戴手套

2.0.4 mg/ml NBT·0.2 mg/ml BCIP显色液

A液(5% NBT:硝基四氮唑蓝):取100 mg NBT溶于2 mL 70% N,N-二甲基甲酰胺(DM

F),混悬促进其溶解,-20℃分装储存。

B液(5% BCIP:5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸):取100 mg BCIP溶于约2 mL 100% N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中,混匀,-20℃分装储存。

C液(pH 9.5,20℃):100 mmol/L Tris,100 mmol/L NaCl,50 mmol/L MgCl2

A液取80 μL,B液取40 μL,C液取9.88 mL。混匀后即可用于碱性磷酸酶的酶促反应显色。临用前配制。阳性反应呈蓝紫色沉淀。(www.daowen.com)

3.4-氯-1-萘酚显色液

4-氯-1-萘酚 100 mg

乙醇 10 mL

0.05 mol/L Tris-HCl(pH 7.6) 190 mL

30% H2O2 10 μL

先将4-氯-1-萘酚溶解于纯乙醇中,然后加入0.05 mol/L Tris-HCl(pH 7.6)190 mL,用前加入30% H2O2,切片显色时间为5~20 min。由于4-氯-1-萘酚溶于乙醇,故勿用乙醇脱水。阳性反应呈蓝色。

4.固蓝BB/AS-MS-磷酸萘酚显色液

A液:0.1%固蓝BB,将100 mg固蓝BB溶于100 mL 0.05 mol/L TBS缓冲液(pH 8.5)中,在磁力搅拌器上充分搅拌。

B液:将20 mg AS-MS-磷酸萘酚溶于0.4 mL二甲基亚砜。

A、B液临用前混合充分搅拌过滤后立即使用。阳性反应呈紫蓝色。

免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。

我要反馈