理论教育 发育生物学实验指导:常用固定液配制方法

发育生物学实验指导:常用固定液配制方法

时间:2023-11-21 理论教育 版权反馈
【摘要】:为组织学与病理学常用固定液之一,不适于组织标本的长期保存。该固定液常用于多肽类激素及酶等蛋白质的固定,4℃保存。

发育生物学实验指导:常用固定液配制方法

1.福尔马林-醋酸-乙醇固定液(FAA)(配方见附表15)

附表15 福尔马林-醋酸-乙醇固定液(FAA)配方

幼嫩材料用50%乙醇代替70%乙醇,可防止材料收缩。若材料坚硬,可略减冰醋酸,略增福尔马林。若材料易收缩,可稍增加冰醋酸。久置时另加入5 mL甘油以防蒸发和材料变硬。此液又可作保存液。固定时间最多10 h。如果用在植物胚胎的材料上,改用下面的配方,效果较好:50%乙醇89 mL+冰醋酸6 mL+福尔马林5 mL。

2.福尔马林-丙酸-乙醇固定液(FPA)(配方见附表16)

附表16 福尔马林-丙酸-乙醇固定液(FPA)配方

固定一般的植物组织,通常固定24 h,可长久保存。

3.乙醇-醋酸-氯仿固定液(卡诺固定液,Carnoy fixative)(配方见附表17)

附表17 卡诺固定液配方

卡洛固定液是研究细胞分裂和染色体的优良固定液。固定时间不宜过久。

4.铬酸-醋酸固定液(配方见附表18)

附表18 铬酸-醋酸固定液配方

根据固定对象的不同,可分为强、中、弱3种配方。弱酸配方用在固定较柔软的材料,如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。固定时间较短,一般为数小时,最长可固定12~24 h,但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1 h;中酸配方用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。为了易于渗透,可在此液中加入2%的麦芽糖尿素。固定时间12~24 h;强酸配方用于固定木质根、茎、成熟子房等。为了易于渗透,可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12~24 h或更长。

5.铬酸-锇酸-醋酸固定液(配方见附表19)

附表19 铬酸-锇酸-醋酸固定液配方

此固定液需现用现配,固定23~48 h。可用于各种植物组织的固定。

6.Lichent’s固定液(配方见附表20)

附表20 Lichent’s固定液配方

(www.daowen.com)

此固定液适用于固定丝状藻类和真菌。

7.Bouin氏固定液(配方见附表21)

附表21 Bouin氏固定液配方

饱和苦味酸过滤,甲醛和冰醋酸最好在临用前加入。为组织学与病理学常用固定液之一,不适于组织标本的长期保存。

8.Bataillon固定液(配方见附表22)

附表22 Bataillon固定液配方

最好在使用前配制,20℃左右方有效,否则必有沉淀出现,不宜使用。为组织学与病理学常用固定液之一。

9.4%(W/V)多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液固定液(配方见附表23)

附表23 4%(W/V)多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液固定液配方

称取4 g多聚甲醛,置于三角瓶中,加入50~80 ml 0.1 mol/L PB,放于70℃左右的水浴锅中,不断摇动使粉末完全溶解,最后加入剩下的PB至100 ml,充分混匀,4℃保存。

10.Karnovsky固定液(配方见附表24)

附表24 Karnovsky固定液配方

先将多聚甲醛溶于0.1 mol/L PB中,再加入戊二醛,最后加剩余的0.1 mol/L PB至100 mL混匀。该固定液适用于电镜免疫组织化学,4℃保存。

11.碳二酰胺-戊二醛(ECD-G)固定液(配方见附表25)

附表25 碳二酰胺-戊二醛(ECD-G)固定液配方

PB与PBS各50 ml等量混合,加入Tris溶解(终浓度为1.4%),以浓HCl调pH至7.0,再将ECD与戊二醛加入混合液,摇匀,再以1 mol/L NaOH在4 min内调pH至7.0。该固定液常用于多肽类激素及酶等蛋白质的固定,4℃保存。

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