实验目的

1.掌握植物花粉活力的检测方法。

2.理解利用Alexander染色液分析花粉活力的实验原理。

3.理解利用I2-KI染色的方法分析花粉活力的实验原理。

实验原理

花粉活力的大小可直接影响植物授粉、受精的过程，与植物的产量密切相关。通过花粉活力的检测，可了解花粉的发育。Alexander染色液（亚历山大染色液）是一种植物花粉类染料，主要成分为孔雀绿、酸性品红、苯酚等，pH为酸性。常用于细胞核染色，是很好的植物花粉粒的染色剂。对于正常成熟的植物花粉，由于细胞核发育正常染色后会呈紫红色。而对于发育不正常的活力较低的花粉因细胞核的畸形，染色后颜色变浅。

花粉中所含淀粉的多少可作为判断花粉发育程度的好坏，大多数正常成熟的花粉呈球形，淀粉含量较高，遇见I2-KI变蓝色，发育不良的花粉往往呈畸形，淀粉含量减少，遇见I2-KI不变色或呈黄褐色。因此也可根据I2-KI染色的情况，可判断花粉活力的高低。

实验用品

1.材料：拟南芥花序或本氏烟草成熟花芽。

2.器材：载玻片，盖玻片，光学显微镜。

3.试剂：孔雀绿，酸性品红，橙黄G，苯酚，水合氯醛，冰乙酸，乙醇。

（1）Alexander染色液的配法：按照以下顺序加入各组分，所有组分加入后混合均匀，避光存放。10 mL体积配制体系：

表35-1　Alexander染色液的配法

续表

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（2）I2-KI染色液的配法：先将3 g KI溶于少量蒸馏水中，待KI完全溶解，加入1 g I2，振荡溶解后，用蒸馏水定容至300 mL，保存在棕色瓶中。待用时，可稀释至2～10倍。

实验程序

1.取材：取盛花时期的花朵，剥取3/5的花萼与花瓣。

2.染色：准备一个载玻片滴入一滴染液（Alexander染色液或I2-KI染色液），从成熟花上将开裂的花药剪下侵入染液，室温染色10～15 min。

3.观察：在光学显微镜下观察并寻找好的视野照相，根据染色的情况统计活性花粉的比例。

实验注意事项

1.在花粉离体萌发实验中，一定采用花药囊裂开的新鲜花为实验材料。

2.多次多花进行观察，求其平均值，不少于20朵花。

思考题与作业

1.统计活性花粉的比例。

2.比较Alexander染色和I2-KI染色方法的异同。

参考文献

Zhang S H，Zhang J S，Zhao J，et al.Distinct subfunctionalization and neofunctionalization of the Bclass MADS-box genes in Physalis floridana[J].Planta,2015,241：387-402.

程志号，李淑霞，孙佩,等.小果野蕉(Musa acuminate Colla)花粉母细胞减数分裂过程异常的细胞学观察[J].热带作物学报,2018,11：2215-2219.

（李巧峡）