实验目的

1.掌握鸡胚人工孵化的基本知识及操作过程。

2.加深对鸡胚发育的感性认识。

实验原理

鸡胚是研究胚胎发育很好的材料，因为它不受季节的限制，我国古代和希腊、罗马时代就有记载。鸟类是体内受精，鸡卵从卵巢排出之前，进行第一次成熟分裂，放出第一极体。卵子排出之后，同其他脊椎动物相似，停留在第二次成熟分裂的中期。精子进入后，第二极体排出，不久雄原核与雌原核融合成为合子，以后进行卵裂。

精子入卵后，3～5 h受精卵到达狭窄部，进行第一次卵裂。鸡卵为端黄卵，卵裂仅在胚盘的表面进行。约20 min后，第二次与第一次卵裂沟互相垂直，分成4个不完全的分裂球，由表面的卵裂沟将4个细胞核分开。细胞质在底部仍相连通。第三次卵裂与第一次平行，有两条卵裂沟在第一次裂沟的两侧，与第二裂沟垂直，但不很规则，也不同时进行。分成8个分裂球时，与4个分裂球相似，仍是细胞核被分隔，但细胞质相连。第三次卵裂以后卵子进入子宫，进行第四次卵裂。从第四次起就不规则，卵裂沟较多，也不同时进行，分裂球可逐个地形成。第四次卵裂后，形成8个中央细胞和8个以上的边缘细胞。到第五次卵裂，形成分裂腔。随着卵裂继续进行，形成很多分裂球，下面的分裂腔也逐渐明显，于是成为囊胚期。胚盘下腔出现后，胚盘的细胞继续分裂，向四周扩张，胚盘逐渐增大，同时胚盘下腔也扩大，胚盘上的细胞有多层逐渐变薄，最后，中央部分成为一层细胞，边缘仍为多层细胞，此时，中央部分起始又形成一个新的胚层，称下胚层。当卵产出体外时，下胚层已形成，已进入原肠期。

实验用品

1.材料

鸡的受精卵（种蛋）。

2.器材

孵卵箱（或电热恒温培养箱），照蛋箱，小剪刀，镊子，培养皿，小药勺，烧杯，吸管。

实验程序

1.鸡卵的孵化

（1）调温：鸡孵化的适宜温度为38～40℃，最适温度39℃，在进蛋前须将孵卵箱的温度调至适宜范围，并稳定观察2～3 d。

（2）选蛋：应选壮年母鸡产的蛋；产出一星期左右、保存适当的卵；蛋形正常、大小均匀、钝端稍大、蛋壳厚薄均匀、无斑点。

（3）进蛋：选适宜孵化的蛋，洗净，消毒（入40℃的1∶2000的高锰酸钾液中浸1～2 min），擦干，用铅笔在蛋壳上注明实验日期、组别或实验人姓名，然后放入蛋盘内，放进孵化箱。在孵化箱内置一杯水，以保持箱内一定的湿度（相对湿度60%～65%）。

（4）翻蛋：每天须巡视检查3～4次，将蛋滚动一下，并将上下层孵卵盘调换一下，使受温均匀。

（5）凉蛋：每天翻蛋时，至少要凉蛋一次，即让蛋在箱外凉5 min左右，后期凉蛋时间可适当延长至30 min左右，以促进胚胎发育。

（6）验蛋：孵化3～4 d可照蛋，可自制一个长20 cm、宽15 cm、高15 cm的长方形木盒，内装一个60 W的灯泡，在上面挖一略小于卵的椭圆形孔。在晚上或较暗的情况下，即可用此装置照蛋。将蛋入于孔内。慢慢转动，即可在卵黄上面看到一个小的胚胎，由胚胎向四周辐射出红色的血管网，此即为发育的胚胎，否则无血管者为未受精卵或死胚，立即取出可作食用蛋。

2.鸡胚的活体观察

（1）开窗法

取孵化33 h左右的卵放在铺有药棉的培养皿上（或染缸上），钝端略倾斜朝上，轻轻转动，让胚盘浮上，用铅笔在蛋壳上确定胚盘的方位并作记号，然后用镊子尖或锐利的刀片将蛋壳去掉一个四方块，然后再小心地撕掉壳膜，最好在壳膜上加一滴0.75%生理盐水，使其湿润。取膜时防止牵动胚体。

壳及壳膜取掉后，用透明胶带封口，送回培养箱，39℃继续孵化，逐日观察发育情况，做好记录。(www.daowen.com)

（2）取胚观察法

①取胚

A.根据实验需要取孵化一定时数的卵，钝端向上置于卵托上，等待片刻，使胚位转正。

B.在卵的1/3处，用镊子刺一圈小洞，随后用镊子将上方的蛋壳揭掉，然后倒掉部分蛋清，再将卵壳剪取一圈，约留一半的蛋壳，此时胚胎显露在卵黄的上表面，若胚位不正，可用玻璃棒拨转，使其转正。

C.用小剪刀沿胚区边缘剪一圈，若为48 h以上的胚胎，剪的时候须用镊子牵拉胚膜，以防止胚膜翻转，然后用小勺将胚膜取出，浸放在盛有生理盐水的培养皿内，洗去卵黄，即可在实体镜下观察。

②活体观察

A.孵化18 h，胚胎发育为原条期（亦为原肠胚期），胚盘分出明区和暗区，胚盘的后端出现细胞增厚区为胚盾。

B.孵化24 h，为神经胚期，胚盘更加扩大，可见到明区有一明显的胚体，前面头褶隐约可见。脊索两旁有体节1～4对，后端原条开始缩短。

C.孵化40 h，躯体演变成圆柱形，头端的神经褶已完全愈合，并分出端脑、间脑、中脑、小脑和延脑五部分。间脑两侧分化出左右视泡，中脑处发生头曲（向右方弯曲）。心脏发生扭曲，位于胚体的腹前方，并占有显要位置。胚外周的卵黄囊血管已形成，有的已与卵黄静脉相接，构成向心的循环。此时，体节10～15对。

实验注意事项

1.用镊子刺蛋壳时，要掌握好力度，防止用力过猛将卵黄膜刺破。

2.用小剪刀沿胚区边缘剪的时候，须用镊子或玻璃棒牵拉胚膜，以防止胚膜翻转。

思考题与作业

1.鸡胚孵化时，为什么每天需要翻蛋与凉蛋？

2.按表25-1写出实验报告。

表25-1　鸡蛋孵化记录表

参考文献

林丹军,尤永隆,张彦定.发育生物学实验[M].北京：科学出版社,2011.

曲漱惠,李嘉泳,黄浙,等.动物胚胎学[M].北京：人民教育出版社,1980.

郑国锠.生物显微技术[M].北京：人民教育出版社,1978.

（李巧峡，梁桂霞）