实验目的
了解无尾两栖类的胚胎发育过程，加深感性认识。
实验原理
对活的胚胎进行观察和描述，即使在当今快速发展的发育生物学研究中也是必要的基础性实验。往往通过最详细、最直观地观察胚胎发育中形态的连续变化，可以掌握胚胎的发展规律，获得丰富的理论知识。用两栖类动物的受精卵做实验是由于其受精卵容易获得，并且它的胚胎容易进行实验操作。非洲爪蟾（Xenopus laevis）是发育生物学研究中公认的模式动物。在我国，蟾蜍（Bufo melenostius）、青蛙（Rana nigromaculata）、泽蛙（Rana limnocharis）、虎纹蛙（Rana tigrina rugulose）和黑斑蛙（Rana nigromaculata）等都是常见的实验材料。
实验用品
1.材料
用实验二十中的受精卵。或用花背蟾蜍自然受精的受精卵。在兰州每年的4月中旬，日最高温度为20℃左右，上午11时左右在池塘或鱼塘里就能抓到抱对的蟾蜍，抓来放到水池中或大烧杯中，水深2 cm左右。在第二天清晨7时左右，抱对蟾蜍就会自然产卵并自然受精。
2.器材
3.试剂
生理盐水，曝气的自来水。
实验程序
在体视显微镜下做活体连续观察（附图22-1）。
1.受精卵：卵子受精后20 min左右，卵膜开始上举，卵周隙逐渐扩大，卵子全部转为动物极朝上，此过程称为卵子的“翻正”。卵子的翻正表明卵子已经受精，在实体镜下，可见到在动物极区卵表面有一极小的黑色圆点，此即为外排的第二极体。
如果卵子受精后迟迟没有翻正，表明卵子没有受精。
2.卵裂：在20～23℃水温条件下，受精后约2 h，受精卵开始第1次卵裂，第1次为经线裂，为2细胞期；约再过40 min，开始第2次卵裂，第2次亦为经线裂，为4细胞期；约再经过30 min即开始第3次卵裂，第3次为纬线裂，裂沟稍偏动物极，因此动物极的分裂球较小，称小分裂球，植物极的较大称大分裂球，此时为8细胞期；第4次又为经线裂，分为16细胞，从32细胞分裂开始出现不规则，接着进入囊胚早期。
3.囊胚期：经过卵裂，分裂球渐次增多，而体积越来越小，约在受精6 h（20℃）形成囊胚，从囊胚早期到囊胚晚期约经过8 h。
4.原肠早期：在发育到囊胚晚期的囊胚边缘带赤道下方，出现一个横的新月形浅沟，细胞由此开始内卷。沟的上方即为背唇，浅沟即为胚孔、背唇的出现是胚胎结束囊胚期，进入原肠期发育的标志，因此以背唇出现为准，划分原肠早期。
5.原肠中期：背唇处细胞不断内卷，动物极细胞也随着下移，此即外包，新月形的胚孔随着扩大成马蹄形，于是产生了左右侧唇。
6.原肠晚期：细胞的内卷运动不断向两侧发展扩大，胚孔也由马蹄形会合成圆形，会合处即为腹唇，此时被包围在胚孔内的这一部分细胞含卵黄较多，移动较慢，阻塞胚孔，称为“卵黄栓”。随着发育，卵黄栓逐渐缩小，最后完全陷入，原肠胚期也告结束。
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附图22-1 花背蟾蜍早期发育各期代表图
A.2细胞；B.4细胞；C.8细胞；D.16细胞；E.囊胚早期；F.囊胚晚期；G.原肠早期；H.原肠中期I.原肠晚期；J.神经板期；K.神经褶期；L.胚胎转动期；M.神经管期；N.孵化期；O.尾芽期；P.肌肉感应期
7.神经胚期：在卵黄栓渐渐缩小而陷入胚体内方时，胚体背部中央部分神经外胚层开始出现一盾形，此区由胚孔向前，前宽后窄，颜色较淡，此即神经板。随着胚胎的发育，神经板的头端逐渐增厚，其头端的增厚区形成感觉板，两侧的增厚区形成神经褶。以后神经褶越来越明显，最后由胚胎的颈部开始向前向后合拢形成神经管，在神经管形成的同时，胚体也由圆形变为头尾端略有伸长的圆筒状。胚胎与受精膜之间的空隙增大，胚胎由于体表纤毛的波动，可在受精膜内转动。
8.尾芽期：胚体不断由短变长，而且由圆形变为侧扁，颈区与尾区出现缢缩，由此胚体的头部、躯干部、尾部三部分区分明显。鳃板隆起更高，视泡、口吸盘明显，大部分胚胎在此期孵化，孵化出的胚胎以口吸盘附于胶膜上。
实验注意事项
1.实验观察时，用镊子或解剖针将卵带翻过来才能看到原肠发育时期的背唇、左右侧唇及卵黄栓。
2.实验观察过程中，根据实验中给出的花背蟾蜍早期胚胎发育分期表，最好不要错过发育的关键期。
思考题与作业
按表22-1要求写出实验报告并绘制花背蟾蜍早期发育图，以表22-2花背蟾蜍早期胚胎发育分期表为依据。
表22-1 花背蟾蜍早期发育实验报告
表22-2 花背蟾蜍早期胚胎发育分期表
续表
郭瑞昌,冯伯森,仝允栩.花背蟾蜍（Bufo raddei）的早期发育及分期[J].兰州大学学报(自然科学版)，1982,18(4)：125-136.
于叶辉,张守纯,刘超.中华大蟾蜍的胚胎发育观察[J].沈阳农业大学学报,2009,40(6)：723-727.
于同雷,郭延蜀.中华蟾蜍指名亚种（Bufo gargarizan gargarizan）早期胚胎发育[J].信阳师范学院学报(自然科学版),2012,25(3)：314-318.
（李巧峡，梁桂霞）
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