实验目的

1.掌握体外跌卵及孤雌生殖的方法。

2.了解单性生殖的机理。

实验原理

腹腔卵为裸卵——即卵子尚未通过输卵管，卵外无胶黏膜，此卵不能接受精子，从而不能成为受精卵。但是通过用带血的玻璃针刺激卵子，即可引起卵裂及胚胎发育，并能获得达到性成熟的个体。此实验机理有二：①针刺代替了精子入卵的动作，对卵子起刺激作用；②针刺时血球随机进入卵内，给卵子带来分裂星光，使卵子能够发生卵裂，从而进入进一步的发育。

实验用品

1.材料

经冬眠期后的花背蟾蜍。

2.器材

实体显微镜，照明灯，解剖盘，解剖器具，注射器，玻璃研磨器，剪刀，镊子，吸管，载玻片，盖玻片，表面皿，玻璃盆，50 mL广口瓶（瓶口颈部绕一圈铁丝以便做一横跨瓶口的铁丝）数个，中型培养皿数套，玻璃挂钩数个，玻璃针数支，盛有70%乙醇的广口瓶数个，盛有蒸馏水的广口瓶数个。以上器皿均事先消毒备用。

3.试剂

0.65%的生理盐水。

实验程序(www.daowen.com)

1.挂卵：解剖一只健壮的雌体，取卵巢于盛有生理盐水的中型培养皿内，解剖镜下将卵巢分成小叶，取一小叶（含100～200粒卵），用玻璃挂钩挂于盛有50 mL 0.65%生理盐水（内含5个本种脑垂体混悬液）的广口瓶内。18～20℃的室温下，10 h后开始有卵跌出，以后陆续增多，16 h渐渐减少，以至跌完或近于跌完为止。

2.针刺：卵巢挂入瓶内，16 h后用吸管吸取跌落瓶底的卵子，移入干净的载玻片上，摆放为单层，用吸水纸吸取卵周围的水分，用肺脏蘸取本种新鲜血液少许涂于卵子表面，用玻璃针（针尖直径2～4 μm）在实体镜下对准卵子的动物极近中央处一一刺入，刺完后，及时将卵放入培养皿的清水中，使卵分散于皿内，并吸去浮于水面的血污，观察期发育。人工孤雌生殖的过程即告结束。

实验注意事项

1.玻璃针的针尖比较细，直径在2～4 μm。

2.针刺时，在实体镜下对准卵子的动物极近中央处一一刺入。

思考题与作业

1.孤雌生殖中，用针刺卵子的目的是什么？

2.血球在孤雌生殖中的作用是什么？

参考文献

朱洗,王幽兰,徐同江.世界第一只无父母蟾蜍产卵传种[J].科学通报,1961,6(4)：52.

邹贤刚,肖英达,黄国屏,等.电刺激家兔卵母细胞孤雌活化的研究[J].动物学报,1993,39：78-83.

（李巧峡，梁桂霞）