图11-2所示为微阵列打印机，在标准点片操作中，一大批载玻片被固定在一个平台上，溶于3×SSC的DNA样本放置于96或384孔板中，此板放在一个支持物上，机械手上有一束专用的弹性载样点片针，机械手将这些点片针伸入相邻的装有DNA样品的孔中，大约每根针吸装1μL DNA样品溶液。然后这些点样针在多个Poly-lysine处理过的玻片上特定位置点一小滴DNA（＜0.5 nL），在每张玻片上点完DNA后，要清洗和烘干点样针，然后吸取下一批DNA样本，并在距上一次点片点很小距离的新位置重复此过程，从而形成高密度的点阵（阵列）。点间距取决于所点DNA液滴的大小，而液滴的大小又取决于点片针的特点和锐利程度以及poly-L-lysine表面的疏水程度。样点圆心间距约200 μm的距离来点片，也可以将此距离缩小到近100 μm。在200 μm的距离下，整个酵母基因组能点于一张1.8 cm2的玻片上，而在100 μm的距离下，大约75 000个人的基因能点于一个标准的1×3显微镜玻片上。

图11-2　微阵列打印机

玻片的后处理：点样后微阵列用于杂交前需要再次水合化、快速干燥、UV交联、封闭、变性等几个步骤的处理。

1. 再次水合化

点样过程一般不会将样点的DNA在该点均匀分布，为了使DNA在样点的各处均匀分布，需将在点样过程中很快干燥的各点再次水合化并快速干燥。将标准台式加热装置的金属板翻转过来，这样可以产生一个平整的金属表面。将加热板升温至80 °C，在一个用塑料制成的玻片水合舱的水池中装入热水（50～60 °C），将每张玻片的点样面接近水面，让水蒸气水合各基因点，直至可以看到所有点出现折射光，立即将玻片放在加热板上，点样面朝上，直至干燥5 s。尽管每批水合所需时间不同，甚至同张玻片上各点所需时间变化很大，但用温控水浴装置进行水合，会得到一致性更好的结果。

2. UV交联(www.daowen.com)

玻片经再次水合化和快速干燥后，可用紫外线照射使DNA交联到玻片上。虽然不是关键步骤，这一处理可增加各点上稳定固定、可杂交DNA的量，尤其是点样液中DNA浓度较低时。将玻片以点样面朝上放在交联仪的塑面上，将时间模式转换至总能量模式，照射能量为60 mJ。

3. 封 闭

封闭是后处理中最关键步骤。剩余自由赖氨酸经修饰后可以降低和标记探针DNA结合力。如果这些基团不被封闭，标记探针就会非特异地结合到玻片表面，并产生极高的背景信号。用succinic anhydride进行酰化封闭。赖氨酸带电氨基对一个羧基碳原子进行亲核攻击，从而形成一个胺键并在分子链的另一端暴露一个自由羧基负电基团。除了将赖氨酸氨基基团转换成胺，这一新生物还有一个带负电的表面，从而可以进一步降低非特异结合DNA。

因为液相中封闭试剂的稳定性有限，封闭过程应快速是重要的。使用一个玻璃缸，一个带柄的玻片槽，该槽应容易放进缸中。将玻片放入槽中，再将槽放入通风橱中，紧邻着玻璃缸。缸中盛有350 mL溶液。将烧杯放在通风橱里的磁力搅拌器上。取15 mL Sodium Borate（1 mol/L，pH8.0）放在烧杯边上待用。称6 g Succinic Anhydride放入烧杯，迅速倒入1,2-methyl pyrrolidinone至335 mL，高速搅拌。Succinic Anhydride溶解后，立即加入Sodium Borate搅拌至溶液混匀，将溶液倒入玻璃缸中，迅速将玻片槽浸入液面下，并上下晃动玻片5次。将玻片槽封口，轻柔摇晃玻片槽15 min。

4. 变 性

在封闭反应进行时或在这之前，准备一个大烧杯或玻璃缸，装入一些沸水，体积应至少是封闭液的两倍。封闭反应即将结束前，停止加热，待水不再沸腾时，迅速将玻片放入水中，上下提拉晃动3～5次并让玻片坐浴2 min。将玻片立即放入装有95%乙醇的玻璃缸。上下提拉玻片槽3～5次，将玻片放入离心机，甩干。经过以上处理的玻片就可以用于杂交。