作为载体必须是固体片状或者膜、表面带有活性基因,以便于连接并有效固定各种生物分子。目前制备芯片的固相材料有玻片、硅片、金属片、尼龙膜等。目前较为常用的支持材料是玻片,因为玻片适合多种合成方法,而且在制备芯片前对玻片的预处理也相对简单易行。
左旋多聚赖氨酸预处理方法:把准备的载玻片放在金属或玻璃架上,使玻片垂直固定,把架子放在一个合适型号的玻璃缸内。一定要使用玻片架,架子要放在低速离心机中,到此步结束时它们要被旋转干燥。最好避免把玻片从一种类型的架子上转移到另一种上。用50 g NaOH溶解于200 mL ddH2O,再加300 mL 95%的乙醇制备500 mL碱性洗液,把玻片完全浸没在洗液中至少2 h,洗完用ddH2O全面冲洗5次,摇5 min冲洗。保持玻片浸没在ddH2O中,一旦洗净玻片,它们暴露于空气中的时间越短越好,因为灰尘会影响修饰和点片的过程。准备修饰溶液(350 mL),包含35 mL poly-L-lysine(0.1%W/V溶于水,Sigma P8920),35 mL灭菌过滤PBS和280 mL ddH2O,把该溶液倒入一个干净的玻璃缸中快速把玻片从最后一次洗液中移到修饰溶液中。轻轻摇动溶液1 h,把修饰处理过的玻片插进一个装有干净ddH2O的缸中,上下抽动5次,把这个玻片架转移到一个低速离心机中(在架下放纸巾吸液体),旋转使玻片干燥(5 min,室温下,1 000 r/min)。用铝箔包裹干燥的玻片,防止灰尘。把包好的玻片架放进一个真空干燥炉中,45 °C,10 min,真空干燥。把玻片从铝箔中取出放进一个干净的塑料玻片架上,用封紧的玻片盒室温储存。这些玻片不能马上用于点片,必须被固化至少数周,使其表面充分疏水干燥,修饰处理后的玻片表面的疏水性对于保证DNA样点足够小以形成高密度阵列是十分重要的。(www.daowen.com)
抽样质检,方法是取出一张玻片,在其表面放150 μL H2O,把玻片与水平呈45°角,观察水滴在玻片表面滑落,如果留下明显的滑落轨迹,就说明该玻片已经可以使用。
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