【实验目的】

（1）掌握从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法以及等电点沉淀法提取蛋白质的方法。

（2）熟悉提取实验步骤及试剂主要作用。

（3）了解其他蛋白质提取方法。

酪蛋白的制备

【实验原理】

蛋白质是一种两性电解质，在一定pH溶液中能够维持一个稳定的状态。当调节蛋白质溶液的pH至其等电点时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子（净电荷为0）。此时，蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的互相排斥，极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时溶解度最小，最易形成沉淀物。

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，其含量约为35 g/L。酪蛋白不是一种简单的蛋白质，它是一些含磷蛋白质的混合物，其平均等电点约为4.8。因此，可利用等电点时蛋白质溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.8，酪蛋白就会沉淀出来。后续操作进一步用蒸馏水、乙醇和乙醚洗涤沉淀，除去脂类等杂质后便可得到较纯的酪蛋白。

【实验试剂与器材】

1. 实验材料

新鲜牛乳。

2. 实验试剂(www.daowen.com)

（1）醋酸缓冲液0.2 mol/L，pH 4.8：取0.2 mol/L醋酸溶液40 mL（11.44 mL冰醋酸稀释至1 000 mL）加0.2 mol/L醋酸钠溶液60 mL，混合即成。

（2）95%乙醇。

（3）乙醚。

（4）0.1 mol/L NaOH：称取4.0 g NaOH，溶解于1 000 mL蒸馏水中。

3. 实验器材

离心机、水浴锅、离心管、移液管、洗耳球、胶头滴管等。

【实验步骤】

【讨论与思考】

（1）从牛乳中制备酪蛋白的基本原理是什么？

（2）用蒸馏水、乙醇、乙醚洗涤沉淀的目的是什么？

（3）请综合运用所学知识，对实验方案进行一定的改良。