【实验目的】

（1）掌握乙酰丙酮显色法测定血清甘油三酯的原理的原理及方法。

（2）熟悉试剂盒提取的方法及原理。

（3）了解测定血清甘油三酯测定的临床意义。

【实验原理】

血清中甘油三酯经正庚烷-异丙醇混合溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成脂肪酸钾与甘油，后者可进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4+的存在下，甲醛与乙酰丙酮试剂反应生成带荧光的黄色物质。3,5-二乙酰-1,4-二氢二甲基吡啶，与同样处理的标准液对比，即可计算出血清中甘油三酯的含量。

【实验试剂与器材】

1. 实验试剂

（1）抽提剂：正庚烷/异丙醇=2/3.5。

（2）0.04 mol/L硫酸溶液。

（3）异丙醇（AR）。

（4）皂化试剂：取6.0 g KOH溶于60 mL蒸馏水，再加异丙醇40 mL混合，置棕色瓶中室温保存。

（5）氧化试剂：称取65 mg过碘酸钠溶于约50 mL蒸馏水，然后加入7.7 g无水乙酸铵溶解后，加6 mL无水乙酸，蒸馏水定容至100 mL，储棕色瓶内室温保存。

（6）乙酰丙酮试剂0.4 mL：乙酰丙酮加到100 mL异丙醇中，混匀，置棕色瓶内室温保存。

（7）10 mg /mL甘油三酯储备液：精确称取三油酸甘油酯1.00 g，溶解于抽提剂中，再用抽提剂定容至100 mL，置冰箱保存。

（8）1 mg/mL甘油三酯应用液：储存液用抽屉剂稀释10倍，置冰箱保存。

2. 实验器材

可见分光光度计，恒温水浴锅。

【实验步骤】

取干燥洁净的带塞试管3支，编号，按表4-4进行操作。

表4-4　甘油三酯含量测定

【结果处理】

计算血清中甘油三酯含量（mg）如下：

(www.daowen.com)

式中：m—— 100 mL血清中甘油三酯含量，mg；

A1—— 样品液的吸光度；

A0—— 标准液的吸光度；

ρ0—— 应用液浓度ρ0=1 mg/mL；

100—— 100 mL血清。

【注意事项】

（1）应空腹采血，并立即分离血清，否则结果偏高。

（2）显色后吸光度随时间延长而略增高，故应立即比色。标本多时，可置冷水浴中逐管比色，这样对结果影响不大。

【讨论与思考】

（1）抽提过程中硫酸的作用是什么？

（2）怎样减少磷脂对实验结果的影响？

【小结】

通过本章的学习，我们知道了储能和供能是脂肪的重要功用之一，是机体内代谢燃料的储存形式，脂肪通过脂酸的β-氧化，可以比其他能源物质提供更多的能量。血浆脂类简称血脂，包括游离胆固醇、胆固醇酯、磷脂、甘油三酯、糖脂、游离脂肪酸等。无论是外源性或内源性脂类均以溶解度较大的脂蛋白复合体形式在血液循环中运输。血脂水平可反映全身脂类代谢的状态。血脂测定可及时地反映体内脂类代谢状况。

【巩固练习】

（1）何谓血脂？血脂包含哪些成分？其以何种形式在血浆中运输？

（2）什么是血浆脂蛋白？按照密度法可将其分为哪几类？简述其的主要作用。

（3）试述机体利用脂库中储存的脂肪氧化供能的过程。

（4）试述酮体生成和利用的过程（包括主要部位、原料、反应过程及相关酶）。

（5）试述酮体生成的生理意义，并举例说明当酮体产生过多时可能导致的危害。

【实验小故事】

Franz Knoop和脂肪酸的β-氧化的发现

人们早就希望能找到一些方法，可以对生物大分子进行动态的分析研究，第一位在这个方向上努力的是德国生物学家Franz Knoop（弗朗兹·科诺普）（1875—1946），1904年为了弄清楚脂肪酸在细胞中的分解过程，Franz Knoop利用苯环在动物体内不易降解的特性，创新性地做了一个实验，他将末端甲基上连有苯环的脂肪酸喂饲狗，然后检测狗尿中的产物。结果发现，食用含偶数碳脂肪酸的狗的尿中有苯乙酸的衍生物苯乙尿酸，而食用含奇数碳脂肪酸的狗的尿中有苯甲酸的衍生物马尿酸。Franz Knoop由此推测无论脂肪酸链的长短，脂肪酸的降解总是每次水解下两个碳原子。据此，Franz Knoop 提出脂肪酸的氧化发生在β-碳原子上，而后Ca与Cb之间的键发生断裂，从而产生二碳单位，此二碳单位Franz Knoop推测是乙酸。

以后的实验证明Franz Knoop推测的准确性，由此提出了脂肪酸的β-氧化作用。