【实验目的】

（1）掌握邻苯二甲醛法测定血清胆固醇的原理及方法。

（2）熟悉试剂盒提取的方法及原理。

（3）了解测定血清胆固醇的临床意义。

【实验原理】

胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550 nm波长处有最大吸收，可用比色法测总胆固醇含量，胆固醇含量在400 mg/100 mL内，与吸光度呈良好线性关系。

本法不需对胆固醇进行抽提，颜色产物也比较稳定，胆红素及一般溶血对结果影响不大，严重溶血者才使结果偏高。本法在20～37 °C条件下显色，显色后5 min开始至0.5 h以上颜色基本稳定。温度过低，显色剂强度减弱，加混合酸后振摇过激能使产热过高，也可使显色减弱。

【实验试剂与器材】

1. 实验试剂

（1）邻苯二甲醛试剂。称取邻苯二甲醛（AR）50 mg，以无水乙醇（AR）溶解并定容至50 mL，冷藏，有效期为45 d。

（2）混合酸。无水乙酸100 mL与浓硫酸100 mL混合。

（3）1 mg/mL标准胆固醇储液。准确称取胆固醇（AR）100 mg，用无水乙醇定容至100 mL。

（4）0.1 mg/mL标准胆固醇应用液。将1 mg/mL标准胆固醇储液准确稀释10倍。

2. 实验器材

待测血清样品（人血清0.1 mL用无水乙醇稀释至4.00 mL）；可见分光光度计。

【实验步骤】

1. 标准曲线的制作(www.daowen.com)

取5支试管编号后，按表4-2顺序加入试剂。

表4-2　标准曲线的制作

加毕，温和混匀，于20～37 °C静置10 min，于550 nm波长比色测定，以100 mL样品总胆固醇量（mg）为横坐标，A550值为纵坐标作标准曲线。

2. 样品测定

取2支试管编号后，按表4-3加入试剂，与标准曲线同时做比色测定。

表4-3　样品测定

测得A550，从标准曲线中可查出100 mL样品的胆固醇质量（mg）。

【注意事项】

（1）混合酸黏度大，要用封口膜充分混匀。保温后如有分层，再次混匀。

（2）混合酸配置时，将浓硫酸加入无水乙醇中，次序不可颠倒。

【讨论与思考】

（1）本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？

（2）在制作标准曲线时，横坐标的总胆固醇的含量是怎样计算的？