【实验目的】

（1）掌握测定β-氧化作用的方法及其原理。

（2）熟悉实验步骤及计算方法。

（3）了解脂肪酸的β-氧化作用。

【实验原理】

脂肪酸的β-氧化操作

【实验试剂与器材】

1. 实验材料

鲜猪肝。

2. 实验试剂

（1）0.5%淀粉溶液，0.9%氯化钠溶液，0.5 mol/L丁酸溶液（取5 mL酸溶于100 mL 0.5 mol/L氢氧化钠溶液中），15%三氯乙酸溶液，10%氢氧化钠溶液，10%盐酸溶液。

（2）0.2 mol/L碘液：25.4 g I + 50 g KI定容到1 000 mL，用标准0.05 mol/L硫代硫酸钠溶液标定。

（3）标准0.01 mol/L硫代硫酸钠溶液：将已标定的0.05 mol/L硫代硫酸钠稀释成0.01 mol/L。

（4）1/15 mol/L PH7.6磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠86.8 mL+1/15 mol/L磷酸二氢钠13.2 mL。

3. 实验器材

5 mL微量滴定管、恒温水浴、吸管、剪刀、50 mL锥形瓶、漏斗、试管等。

【实验步骤】(www.daowen.com)

（1）肝糜制备：取肝用0.9%氯化钠液冲洗污血后，用滤纸吸去表面的水分。称取肝组织5 g置研钵中，加少量的0.9%氯化钠研成细浆。再加0.9%氯化钠液到总体积为10 mL。

（2）取2个50 mL锥形瓶，各加入3 mL 1/15 mol/L磷酸pH 7.6的磷酸盐缓冲液。向一个锥形瓶中加入2 mL正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入2 mL肝糜。混匀于43 °C恒温水浴内保温。

（3）沉淀蛋白质：保温1.5 h后，取出锥形瓶，各加入3 mL 15%的三氯乙酸，在对照瓶内追加2 mL正丁酸，混匀，静置15 min，过滤。将滤液收集在2支试管中。

（4）酮体的测定：吸取两种滤液各2 mL分别放入另2个锥形瓶中，再加3 mL 0.1 mol/L碘液和3 mL 10%氢氧化钠液。摇匀后，静置10 min。加入3 mL10%盐酸中和。然后用0.01 mol/L标准硫代硫酸钠液滴定剩余的碘。滴至浅黄色时，加入3滴0.1%淀粉液作指示剂。摇匀，滴至蓝色消失为止。记录所消耗的硫代硫酸钠液的体积（mL）。

（5）结果计算：

式中：A—— 滴定对照所消耗的0.01 mol/L硫代硫酸钠溶液的体积，mL；

B—— 滴定样品所消耗的0.01 mol/L硫代硫酸钠溶液的体积，mL；

CNa 2S 2 O3—— 标准硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L；

1/6—— 1 mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量。

【注意事项】

（1）用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。

（2）注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。

【讨论与思考】

（1）为什么说脂肪酸β-氧化实验的关键是制备新鲜的肝糜?

（2）什么叫酮体?为什么正常代谢时产生的酮体量很少?