【实验目的】

（1）掌握糖的呈色反应和定性鉴定原理。

（2）熟悉鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。

（3）了解鉴定还原糖的方法及其原理。

一、呈色反应

糖的呈色反应和定性鉴定

（一）Molish反应—— α-萘酚反应

【实验原理】

糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物，再与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，又称紫环反应。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。

【实验材料】

（1）Molish试剂：取5 g α-萘酚用95%乙醇溶解至100 mL，临用前配制，棕色瓶保存。

（2）5%葡萄糖溶液。

（3）5%蔗糖溶液。

（4）5%淀粉溶液。

【实验步骤】

取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，空白对照管用水代替糖溶液，然后加两滴Molish试剂，摇匀。倾斜试管，沿管壁小心加入约1 mL浓硫酸，勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。

（二）酮糖的Seliwanoff反应

【实验原理】

该反应是鉴定酮糖的特殊反应。酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20～30 s。醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。

【实验材料】

Seliwanoff试剂：0.5 g间苯二酚溶于1 L盐酸（V(H2O)∶V(HCl)=2∶1）中，临用前配；5%葡萄糖；5%蔗糖；5%果糖。

【实验步骤】

取试管，编号，各加入Seliwanoff试剂1 mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。

二、还原糖的检验

（一）Fehling试验

【实验原理】

Fehling试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehlin试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。

【实验材料】

（1）Fehling A溶液：称取34.5 g硫酸铜溶于500 mL蒸馏水中。(www.daowen.com)

（2）Fehling B溶液：称取125 g NaOH 和137 g酒石酸钾钠溶于500 mL蒸馏水中，储存于橡皮塞玻璃瓶中。临用前，将Fehling A溶液和Fehling B溶液等量混合。

（3）5%葡萄糖溶液。

（4）5%果糖溶液。

（5）5%蔗糖溶液。

（6）5%麦芽糖溶液。

（7）5%淀粉溶液。

【实验步骤】

在4支试管中分别取Fehling A溶液和Fehling B溶液各0.5 mL混合均匀，并于水浴中微热后，再分别加入5滴葡萄糖、5滴果糖、5滴蔗糖、5滴麦芽糖、5滴淀粉的溶液，振荡再加热，注意颜色变化及有否沉淀析出。

（二）Barfoed试验

【实验原理】

在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。Barfoed试剂为弱酸性。单糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3 min，而还原二糖则需20 min左右。所以，该反应可用于区别单糖和还原二糖。但当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应。

【实验材料】

（1）Barfoed试剂：称取16.7 g乙酸铜溶于200 mL水中，加1.5 mL冰醋酸，定容至250 mL。

（2）5%葡萄糖溶液

（3）5%果糖溶液。

（4）5%蔗糖溶液。

（5）5%麦芽糖溶液。

（6）5%淀粉溶液。

【实验步骤】

取试管，编号，分别加入2 mL Barfoed试剂和2～3滴待测糖溶液，煮沸2～3 min，放置20 min以上，比较各管的颜色变化。

【注意事项】

（1）Molish反应非常灵敏，0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈现阳性反应。因此，不可在样品中混入纸屑等杂物。当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做。

（2）果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间较长，且只能产生黄色至淡黄色。戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成绿色至蓝色产物。

（3）酮基本身没有还原性，只有在变成烯醇式后，才显示还原作用。

（4）糖的还原作用生成Cu2O沉淀的颜色决定于颗粒的大小，Cu2O颗粒的大小又决定于反应速度。反应速度快时，生成的Cu2O颗粒较小，呈黄绿色；反应速度慢时，生成的Cu2O颗粒较大，呈红色。溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计，而不能依据沉淀的颜色来判断。

（5）Barfoed 反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部，溶液仍为深蓝色，应注意观察试管底部红色的出现。

【讨论与思考】

（1）总结和比较本实验几种颜色反应的原理和应用。

（2）举例说明哪些糖属于还原糖。