理论教育 PCR仪的使用及主要技术参数分析

PCR仪的使用及主要技术参数分析

时间:2023-11-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:(一)PCR仪的主要技术参数PCR仪的主要技术参数有样品容量、温控范围、温控精确度、温控速率、最大循环数目和程序数目等,如表2-3所示。表2-3PCR仪的主要技术参数(二)PCR仪的使用根据PCR反应条件,以Eppendorf Mastercycler梯度PCR仪为例,进行PCR仪的设定。同样的方法设定变性、退火、延伸3个步骤的温度和时间。

PCR仪的使用及主要技术参数分析

(一)PCR仪的主要技术参数

PCR仪的主要技术参数有样品容量、温控范围、温控精确度、温控速率、最大循环数目和程序数目等,如表2-3所示。

表2-3 PCR仪的主要技术参数

(二)PCR仪的使用

根据PCR反应条件,以Eppendorf Mastercycler梯度PCR仪为例,进行PCR仪的设定。反应条件:循环1:94 °C,3 min;循环2:94 °C变性45 s,52 °C退火45 s,72 °C延伸1 min,共30个循环;最后72 °C延伸10 min。

使用步骤:

(1)打开电源

(2)通过按[1][4]键,选择文件菜单,按[Enter]键进入。(www.daowen.com)

(3)通过按[1][4]键,选择新建菜单[New],按[Enter]键进入,编写新的反应条件程序。

(4)通过按[Enter]键,选择热盖温度的设定项;按数字键输入数值,结束按[Enter]键。

(5)进入预变性条件的设定,用[Set]键,选择温度选项[T],用数字键设定温度,按[Enter]键确认,再用数字键设定预变性时间,按[Enter]键确认。同样的方法设定变性、退火、延伸3个步骤的温度和时间。如果反应条件需要进行梯度设定,可以按[Opt]键,选择梯度[G]设定。

(6)用[Set]键,选择循环次数选项[Go To],按[Enter]键进入,按数字键输入数值选择下一循环的起始步骤,一般为按[Enter]键确认,再按数字键输入循环的次数,按[Enter]键确认。

(7)用同样方法设定最终延伸的温度和时间。

(8)按[Exit]键,推出[New]菜单,按[Enter]两次,确认程序名称。

(9)回到主菜单,按[Start]键,启动程序。

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