分光光度计的使用

（一）721型分光光度计

波长范围为360～1 800 nm，在410～700 nm时灵敏度较好。该仪器用棱镜分光，光电管作检测器，光电流放大后，用一高阻毫伏计直接指示读数，如图2-2所示。

图2-2　721型分光光度计

721型分光光度计的操作方法如下：

（1）仪器未接通电源时，电表指针必须位于刻度“0”上，否则可用电表上的校正螺丝进行调节。

（2）接通电源（220 V），打开样品室的盖板，使电表指针指示“0”位，预热20 min，转动“波长选择”钮，选择所需波长，用“灵敏度选择”钮选用相应的放大灵敏度挡（灵敏度范围：第一挡1倍；第二挡2倍；第三挡20倍），调整“0”电位器校正“0”位。

（3）将比色杯分别盛空白液、标准液和待测液，放入暗箱中的比色杯架，先置空白液于光路上，打开光门，旋转“100”电钮位，使电表指针准确指向T 100%，反复几次调整“0”及100%透光度。

（4）将比色杯架依次拉出，使标准液和待测液分别进入光路，读取吸光度值。每次测定完毕或换盛比色液时，必须打开样品室的盖板，以免光电管持续曝光。

（二）722型分光光度计

近年来，我国在721型基础上新生产的722型分光光度计，其特点是用液晶板直接显示透光度和吸光度，用光栅作单色器，使用方便，稳定性提高，如图2-3所示。

图2-3　722型分光光度计

722型分光光度操作方法如下：

（1）检查722型分光光度计的旋钮，使选择钮指向透光度“T”，灵敏度钮置1挡（此时放大倍率最小）。

（2）接通电源，打开检测室盖（此时光门自动关闭），打开电源开关，指示灯亮，预热20 min。

（3）调节波长旋钮至所需波长。

（4）比色杯分别盛装空白液、标准液和待测液，依次放入检测室比色杯架内，使空白管对准光路。

（5）打开检测室盖，调节“0”旋钮，使数字显示为“0.00”，盖上检测室盖（光门打开），调节透过率“100”旋钮，使数字显示为“100.0”，重复数次，直至达到稳定。

（6）吸光度A的测量：选择钮拨向“A”，显示为“.000”。如果不是此值，可调节消光零钮，使其达到要求。再移动拉杆，使标准液和待测液分别置于光路，读取“A”值，然后再使空白液对准光路，如A值仍为“.000”，则以上标准液与待测液读数有效。

（7）打开检测室盖，取出比色皿，倾去比色液，用水冲洗干净，倒置于铺有滤纸的平皿中。

（8）浓度C的测定：选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的标准液放入光路，调节浓度旋钮，使数字显示为标定值，再将待测液放入光路，即可读出待测液的浓度值。

（9）关上电源开关，拔出电源插头，取出比色皿架，检查检测室内是否有液体溅出并擦净。检测室内放入硅胶袋，盖上检测室盖后套上仪器布罩。

（三）UV 1102型紫外分光光度计

如图2-4所示，UV 1102型紫外分光光度计常用氢灯作为光源，其发射波长的范围为150～400 nm，简易操作如下：

（1）启动电源开关后，仪器会自动进行质检测试，待每项指标测试完成（大约需要1 min）。

（2）质检完后，仪器会制动进入%T/ABS画面，此画面有4个选项，既NUM WL、WL Setting、Date Mode、End Setting。

（3）首先，用NUM WL来测试波长的数目，按[1]键进入NUM WL子菜单，用于设定测试波长的数目。设置完后按[Enter]键确定。然后，按[2]键进入WL Setting，用于显示NUM WL设定的波长数，设置完后按[Enter]键确定。按[3]键进入Date Mode，选择要使用的数据模式%T或ABS。各种条件设定完成后，最后按[0]键选择End Setting。按[0]键后，仪器进入%T/ABS Autozero画面，此时将装有空白样品的比色皿放入样品室中，再按[START/STOP]键，可进行零点的自动调整。自动调整后，将装有空白样品的比色皿取出，换成装有被测样品的比色皿，再按[START/STOP]键进行测量。(www.daowen.com)

图2-4　UV 1102型紫外分光光度计

（四）Alpha-1506紫外可见光分光光度计

波长范围为200～1000 nm，该仪器采用低杂散光、高分辨率的单光束光路结构单色器，具有良好的稳定性，重现性和精确的测量读数，可完成定量测量，DNA/蛋白质测量，动力学分析等，如图2-5所示。

图2-5　Alpha-1506紫外可见光分光光度计

Alpha-1506紫外可见光分光光度计操作方法如下：

（1）给仪器通上电，仪器会自动自检并初始化，系统自检完成之后进入主菜单界面。测试前需让仪器至少预热15 min。

（2）在主菜单中按[1]键进入“光度计基本模式”测试界面，通过按[F3]键，共有4种测试模式供选择，分别为：吸光度，透过率，能量，含量。按[F3]键后按[∧]或者[∨]选择吸光度模式，按[Enter]键确认。

（3）设置波长：按[SET λ]，屏幕下方出现对话条，用数字键输入想要设置的波长，按[Enter]键确认。

（4）将比色杯分别盛装空白液、标准液和待测液，打开检测室，依次放入比色杯架内，使空白管对准光路。

（5）调空白：在“光度计基本模式”主界面中，按[ZERO]键调空白。

（6）吸光度值的测量：将比色杯架依次拉出，使标准液和待测液分别进入光路，读取吸光度值。

（7）测量完成后，打开检测室盖，将比色杯架全部推入，取出比色皿，倾去比色液，用水冲洗干净，倒置于铺有滤纸的平皿中。

（8）关上电源开关，拔出电源插头，检查检测室内是否有液体溅出并擦净，盖上检测室盖后套上仪器布罩。

（五）注意事项

（1）仪器需安装在稳固不受振动的工作台上，不能随意搬动。严防振动、潮湿和强光直射。

（2）比色皿先用蒸馏水洗后，再用比色液润洗才能装比色液。盛装比色液时，约达比色皿2/3体积，不宜过多或过少。若不慎使溶液流至比色皿外面，须用棉花或拭镜纸擦干，才能放入比色架。拉比色杆时要轻，以防溶液溅出，腐蚀机件。

（3）千万不可用手或滤纸等摩擦比色皿的光滑面。

（4）比色皿用后应立即用自来水冲洗干净，若不能洗净，用5%中性皂溶液或洗衣粉稀溶液浸泡，也可用新鲜配制的重铬酸钾洗液短时间浸泡，然后用水冲洗干净，倒置晾干。

（5）每套分光光度计上的比色皿和比色皿架不得随意更换。

（6）试管架或试剂不得放置于仪器上，以防试剂溅出腐蚀机壳。

（7）如果试剂溅在仪器上，应立即用棉花或纱布擦干。

（8）测定溶液浓度的吸光度值在0.2～0.8最符合吸收定律，线性好，读数误差较小。如吸光度小于0.2或大于0.8，可调节比色液浓度，适当加浓或稀释，再进行比色。

（9）合上检测室连续工作时间不宜过长，以防光电管疲乏。每次读完比色架内的一组读数后，立即打开检测室盖。

（10）仪器连续使用不应超过2 h，如使用时间长，则中途需间歇0.5 h再使用。

（11）测定未知待测液时，先作该溶液的吸收光谱曲线，再选择最大吸收峰的波长作为测定波长。

（12）722型分光光度计的左侧下角有一干燥剂筒，检测室内放硅胶袋，应经常检查，发现硅胶变色，应更换新硅胶或烘干再用。

（13）仪器较长时间不使用，应定期通电，使用前预热。