自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有160余年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。

（一）基本原理

透析是利用蛋白质等生物大分子不能透过半透膜的性质的一类纯化方法。用半透膜将含生物大分子的盐类溶液与蒸馏水（或其他不含该生物大分子的溶液）分隔开，放置一段时间后，大分子溶液的成分就会发生改变，除不能透过膜的生物大分子外，其他低分子物质（如盐类、单糖或二糖等）则可透过膜而使两边的成分达到平衡，膜两侧这些物质的浓度都会发生明显的变化。

透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，同时还正比于膜的面积和温度，通常是4 °C透析，升高温度可加快透析速度。

（二）透析膜

透析膜可用动物膜和玻璃纸等，用得最多的是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国联合碳化物公司（Union Carbide）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）通常为1万左右。商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23～50 mm。为防干裂，出厂时都用10%的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其他生物活性物质有害，用前必须除去。可先用50%乙醇煮沸1 h，再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明，50%乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4 °C蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN3，以防长菌。洗净晾干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。(www.daowen.com)

新透析袋如不做如上的特殊处理，则可用沸水煮5～10 min，再用蒸馏水洗净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入透析液，通常要留1/3～1/2的空间，以防透析过程中，透析的小分子量物质较多时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋胀破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加 50%是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁力搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧杯的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。

（三）透析的分类

（1）沉淀法去盐透析是应用最为广泛的一种透析方法。在盐析后，将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内，再将袋浸入蒸馏水或生理盐水中，经过一段时间，袋内的盐类除净，从而达到除盐的目的。

（2）平衡透析是另一类常用的透析方法。将盛有大分子溶液的透析袋浸入一定浓度盐类溶液或缓冲溶液中，经过一段时间后，袋内外的盐类浓度阈值即可达到平衡。