理论教育 低价易制备:生化实验常用梯度溶液-NaI

低价易制备:生化实验常用梯度溶液-NaI

时间:2023-11-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:由于价格低,容易制备,是现在实验室里常用于细胞器、病毒、RNA分离的梯度材料,但由于有较大的渗透压,不宜用于细胞的分离。NaI也可用于分离天然或变性的DNA。可用于细胞、细胞器和病毒的分离。

低价易制备:生化实验常用梯度溶液-NaI

(一)梯度材料的选择原则

(1)与被分离的生物材料不发生反应,且易与所分离的生物材料分开。

(2)可达到要求的密度范围,且在所要求的密度范围内,黏度低,渗透压低,离子强度和pH变化较小。

(3)不会对离心设备发生腐蚀作用。

(4)容易纯化,价格便宜或容易回收。

(5)浓度便于测定,如具有折光率。

(6)对于分析超速离心工作来说,它的物理性质,热力学性质应该是已知的。

(二)梯度材料的选择范围

1. 蔗 糖

水溶性大,性质稳定,渗透压较高,其最高密度可达1.33 g/mL。由于价格低,容易制备,是现在实验室里常用于细胞器、病毒、RNA分离的梯度材料,但由于有较大的渗透压,不宜用于细胞的分离。(www.daowen.com)

2. 聚蔗糖

商品名Ficoll,常采用Ficoll-400,也就是相对分子重量为400 000。Ficoll渗透压低,但它的黏度却特别高,为此常与泛影葡胺混合使用以降低黏度。主要用于分离各种细胞包括血细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞、鼠肝细胞等。

3. 氯化铯

一种离子性介质、水溶性大,由于它是重金属盐类,在离心时形成的梯度有较好的分辨率,被广泛地用于DNA、质粒、病毒和脂蛋白的分离,但价格较贵。

4. 卤化盐类

KBr和NaCl可用于脂蛋白分离,KI和NaI可用于RNA分离,其分辨率高于铯盐。NaI也可用于分离天然或变性的DNA。

5. Percoll

商品名,一种SiO2胶体外面包了一层聚乙烯吡咯酮(PVP),渗透压低,对生物材料的影响小,而且颗粒稳定,在冷却和冻融情况下还是稳定的。其黏度高,在酸性pH和高离子强度下不稳定。可用于细胞、细胞器和病毒的分离。

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