（一）固定相

固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。它对层析的效果起着关键的作用。

（二）流动相

在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一。

（三）分配系数及迁移率（或比移值）

分配系数是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值，常用K来表示。分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据。

式中：Cs—— 固定相中的浓度；

Cm—— 流动相中的浓度。

迁移率（或比移值）是指在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。常用Rf来表示。实验中我们还常用相对迁移率的概念。相对迁移率是指在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。它可以≤1，也可以＞1，用Rx来表示。(www.daowen.com)

不同物质的分配系数或迁移率是不同的。分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件。很显然，差异越大，分离效果越理想。

分配系数主要与下列因素有关：被分离物质本身的性质；固定相和流动相的性质；层析柱的温度。对于温度的影响有下列关系式：

式中：K—— 分配系数（或平衡常数）；

ΔG⊖—— 标准自由能变化；

R—— 气体常数；

T—— 绝对温度。

这是层析分离的热力学基础。一般情况下，层析时组分的ΔG⊖为负值，则温度与分配系数成反比关系。通常温度上升20 °C，K值下降一半，它将导致组分移动速率增加。这也是为什么在层析时最好采用恒温柱的原因。有时对于K值相近的不同物质，可通过改变温度的方法，增大K值之间的差异，达到分离的目的。