卵母细胞发育不同步,性成熟的斑马鱼卵巢同时存在多个发育阶段的卵母细胞。斑马鱼卵母细胞的生长与硬骨鱼类相似,卵母细胞经历初级生长期、皮质滤泡期、卵黄生成期和成熟期,最终成熟卵子被排到卵巢腔(图7-3)。
1.初级生长期
初级生长期卵母细胞体积小,多呈三角形或长方形,卵质呈较强嗜碱性(图7-4a)。随着卵母细胞的增大,能明显观察到1个至数个核仁位于核膜边缘(图7-4b)。卵母细胞外的滤泡上皮很难区分。
2.皮层滤泡期
随着卵母细胞的生长,体积不断增大,进入皮层滤泡期。该阶段的卵母细胞由一层颗粒细胞包围,卵母细胞边缘(皮质层)出现皮质泡,其数量增多,体积变大,并延伸至细胞核周围(图7-5a~d)。核仁数量增多,大多数核仁分布于核膜的内侧边缘。放射带开始形成,并逐渐增厚(图7-5b~e)。核内可见灯刷染色体(图7-5f)。
图7-3 卵巢内包含各个发育阶段的卵母细胞 H-E
1.细胞核;2.核仁;3.初级生长期卵母细胞;4.皮质泡;5.卵黄滴;6.排卵后卵泡
图7-4 初级生长期卵母细胞 H-E
a.卵母细胞呈三角形,胞质嗜碱性;b.核仁位于核膜周围,滤泡上皮很难区分
1.初级生长期卵母细胞;2.细胞核;3.核仁
图7-5 皮层滤泡期卵母细胞 H-E
a.卵母细胞体积增大,核仁数量增多,皮质泡形成;b.早期细胞边缘出现皮质泡,放射带不明显;c.皮质泡数量增多,体积变大;d.最终皮质泡延伸至细胞核周围;e.卵母细胞体由一层颗粒细胞包围,放射带明显;f.多数核仁分布于核膜的内侧缘,核内可见灯刷染色体
1.皮质泡;2.颗粒细胞;3.细胞核;4.核仁;5.放射带;6.灯刷染色体
3.卵黄生成期
第三阶段为卵黄生成期,此期卵母细胞开始形成卵黄物质,包括小的卵黄滴及体积较大的卵黄球。早期细小的卵黄滴围绕皮质泡,一些卵黄滴可进入皮质泡内(图7-6a),随着卵黄物质积累,卵黄物质逐渐充满皮质泡及整个胞质(图7-6b)。放射带变厚,可见卵黄样颗粒黏附于放射带外侧(图7-6c)。
4.成熟期
在卵母细胞发育的最后一个阶段(成熟期),由于卵黄物质的持续增加,卵质的面积减少,卵黄滴相互融合;卵核偏移,时常观察不到细胞核(图7-6d)。
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图7-6 卵黄生成期及成熟期卵母细胞 H-E
a.卵黄生成期早期卵黄滴围绕皮质泡,也可进入皮质泡内;b.随着卵黄物质积累,卵黄物质逐渐充满皮质泡及整个胞质;c.卵黄样颗粒黏附于放射带外侧;d.成熟期卵黄滴融合,充满胞质,卵核偏移
1.皮质泡;2.细胞核;3.颗粒细胞;4.放射带;5.卵黄滴;6.颗粒细胞的卵黄样颗粒
5.排卵后卵泡和闭锁卵泡
成熟卵母细胞排卵后,卵泡变为空囊,颗粒细胞脱落到腔,卵泡周围挤压变形(图7-7)。除了以上的卵母细胞形态,有时可观察到闭锁卵母细胞(图7-8)。闭锁卵母细胞的卵黄膜和透明带解体,核固缩,染色质变形。
斑马鱼卵巢内具有大量的网状纤维,分布于皮质泡细胞外侧,包裹各期卵母细胞,构成卵巢的支架。毛细血管穿行于网状纤维间,有规律地围绕卵母细胞(图7-9)。此外,PAS反应能清晰地看到卵母细胞皮层滤泡期到卵黄生成期的卵黄物质聚积变化(图7-10)。
图7-7 排卵后卵泡 H-E
a.低倍镜下排卵后卵泡;b.a图中方框处放大
1.排卵后卵泡;2.颗粒细胞
图7-8 闭锁卵泡 H-E
a.发生在皮层滤泡期的闭锁卵泡;b.发生在卵黄生成期的闭锁卵泡
1.闭锁卵泡;2.颗粒细胞;3.透明带
图7-9 卵巢网状纤维分布 Gordon-Sweet
a、b.卵巢网各期卵母细胞周围都分布有网状纤维;c、d.毛细血管穿行于网状纤维间,有规律地围绕卵母细胞;e、f.网状纤维位于颗粒细胞外侧。b、d、f分别为a、c、e图中方框处放大
1.卵母细胞;2.细胞核;3.皮质泡;4.颗粒细胞;5.放射带;6.网状纤维
图7-10 卵母细胞 PAS反应
a.皮层滤泡期早期卵母细胞;b.皮层滤泡期中期卵母细胞;c.皮层滤泡期晚期卵母细胞;d.卵黄生成期卵母细胞
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