理论教育 厌氧系统中产甲烷微生态响应机制研究

厌氧系统中产甲烷微生态响应机制研究

时间:2023-11-06 理论教育 版权反馈
【摘要】:气相中δ13CH4和δ13CO2的测试方法参照2.3节。qPCR中所使用的引物信息见表2-6。每个qPCR反应体系为20 μL,包括:10μL SYBR Premix Ex-Taq TM溶液、2 μL DNA模板溶液、引物溶液各0.4μL和7.2μL Milli-Q水。qPCR程序为:预变性94℃10 min;45个循环包括:变性94℃10 s,退火60℃30 s,延伸60℃30 s;最后于60℃延伸7 min。PCR反应均在Mastercyclerep realplex2qPCR仪内进行。共生乙酸氧化细菌的测试方法同3.2.3章节。

厌氧系统中产甲烷微生态响应机制研究

1.气相

参照2.2.1节。气相中δ13CH4和δ13CO2的测试方法参照2.3节。

2.液相

参照2.2.2章节。

3.固相

参照2.2.3章节。

4.qPCR(www.daowen.com)

DNA的提取参照本书第3.2.3.4章节。采用SYBR Green方法定量分析各微生物种群的丰度,包括甲烷杆菌目Methanobacteriales(MBT-set)、甲烷微菌目Methanomicrobiales(MMB-set)、甲烷鬃毛菌科Methanosaetaceae(Mst-set)、甲烷八叠球菌科Methanosarcinaceae(Mscset)、古菌Archaea(ARC-set)以及共生乙酸氧化细菌(FTHFS-set和ACSset)。qPCR中所使用的引物信息见表2-6。每个qPCR反应体系为20 μL,包括:10μL SYBR Premix Ex-Taq TM溶液(TaKaRa,Japan)、2 μL DNA模板溶液、引物溶液各0.4μL和7.2μL Milli-Q水。qPCR程序为:预变性94℃10 min;45个循环包括:变性94℃10 s,退火60℃(MMB-set使用63℃)30 s,延伸60℃30 s;最后于60℃延伸7 min。

在本实验中仅对各目标微生物种群进行了相对定量分析,制作标准曲线所用的DNA参照模板为纯化后的样品DNA,针对各古菌类群,其制作过程如下:采用表2-6中引物,包括MBT-set、MMB-set、Mst-set、Msc-set和ARC-set分别对纯化后的DNA样品进行扩增,反应体系为50μL,包括:1×PCR缓冲液(5μL),0.75 U的Taq DNA聚合酶(0.6 μL),0.2 mmol/L核苷酸(1μL),0.40μmol/L引物(各0.5μL),1.5 mmol/L MgCl2(3μL)。PCR程序为:预变性94℃10 min;45个循环包括:变性94℃10 s,退火60℃(MMB-set使用63℃)30 s,延伸60℃30 s;60℃延伸7 min。各古菌类群标准曲线的建立方法与共生乙酸氧化细菌相同,参照本书第2.4.3节。

PCR反应均在Mastercycler®ep realplex2qPCR仪(Eppendorf AG,Hamburg,Germany)内进行。共生乙酸氧化细菌的测试方法同3.2.3章节。

5.数据分析与计算方法

参照2.5节。

免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。

我要反馈