如图3-2所示，在无CH3F时，甲烷化过程的稳定碳同位素分离效应因初始pH的不同产生较大差异。在pH 5.5的反应器中δ13CH4的平均值为（-57.9±2.8）‰，而在pH 6.5和pH 6.0的反应器中，则分别为（-46.1±3.5）‰和（-46.4±7.0）‰（表3-3）。由此表明，pH 5.5下氢营养型甲烷化途径的贡献更大。

图3-2 不同pH各反应器内的δ13CH4和δ13CO2

为计算氢营养型甲烷化途径的贡献率（fmc），监测了初始pH为5.5且暴露于CH3F下的反应器内的δ13CH4和δ13CO2，以此作为氢营养型甲烷化途径产物的稳定碳同位素特征值。在低pH和CH3F双重胁迫下，甲烷化反应产生了强烈的稳定碳同位素分馏效应（表3-3）。δ13CH4和δ13CO2分别为-84‰～-68‰和-9.5‰～-0.6‰，αc则达到1.083，呈现出典型的氢营养型甲烷化代谢途径的特征[200]。可见，在pH 5.5且存在乙酸发酵型途径抑制因子时，共生乙酸氧化和氢营养型甲烷化途径可独立启动，相应的，乙酸氧化共生菌群成为甲烷化中心。

表3-3 不同pH各反应器内游离乙酸浓度和产甲烷途径分布(www.daowen.com)

注：δ13CH4-new、δ13CO2-new、αc和fmc是根据乙酸降解率在10%～80%期间获得数据的计算结果。

随着乙酸的逐渐降解，由于甲烷化反应更喜好利用轻质碳，致使重质的13C在液相残余乙酸内富集。当乙酸浓度降到极低时，富集效应使得δ13CH4和δ13CO2均出现大幅度增加。因此，在评价甲烷化代谢途径时仅利用了乙酸降解率为10%～80%阶段的数据。

在初始pH 5.5且无CH3F存在时，稳定碳同位素分馏效应显著减弱，其αc=1.034，为乙酸发酵型途径和氢营养型途径混合进行的特征[139]，此时氢营养型甲烷化途径的比例约为51%。而在pH 6.5和6.0的反应器内，αc分别为1.008和1.014，此时甲烷主要通过乙酸发酵型途径产生，氢营养型甲烷化途径的比例仅占到21%～22%。