本实验采用总容积为330 mL的玻璃瓶（Fisher Scientific Laboratory，USA）作为反应容器。液相的体积为100 mL。反应体系采用改良的BMP培养基作为基础培养基（表2-2），添加微量元素（表2-3）和维生素储备液（表2-4）。添加CH3COONa（分析纯，上海国药试剂有限公司，中国）作为碳源，初始乙酸浓度为100 mmol/L。另取适量污泥作为接种物，接种浓度为3 g-VS/L。实验中欲以CH3F为乙酸发酵型甲烷化途径抑制剂，通过添加CH3F分离乙酸发酵型和氢营养型产甲烷途径，因此设置了添加和不添加CH3F（气相中浓度为3%，V/V）的两组。CH3F的使用方法根据文献[136-138]和预实验中的研究结果确定。对为测试污泥内源呼吸的产甲烷效应，本实验还设置了一组不添加乙酸基质的反应器作为空白（Blank）对照。反应器设置及命名见表3-1，每组有2个反应器。

表3-1 不同初始pH的反应器设置

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液相体系构建完成后，向反应器气相通入N2（99.999%）5 min，并用真空泵抽吸循环5次（2 min/次），以驱除其中的空气。之后将其放入55℃恒温箱静置培养。定时采集和测试气相和液相样品，直至乙酸浓度低于检测限。培养结束时，取出一定量污泥样品用于微生物菌群检测。