【摘要】：焦磷酸测序由美国Research and testing实验室完成，方法如下：采用引物28F和519R[195]对细菌16S rRNA基因的V1区域进行扩增。古菌则采用了引物349F和806R[196]。在454测序仪中，样品之间通过链接在引物上的Tag进行区分。构建的上游引物包括：Linker A、Tag和细菌的28F序列。PCR程序为：95℃5 min，35个循环，72℃延伸10 min。采用Roche 454 FLX Titanium方法完成测序过程。然后，分析处理所有的测序结果。去掉空载体、测序质量差的序列以及PCR嵌合体序列后，得到古菌和细菌群落的高质量序列。
焦磷酸测序由美国Research and testing实验室（Lubbock，TX，U.S.A.）完成，方法如下：采用引物28F和519R[195]对细菌16S rRNA基因的V1区域进行扩增。古菌则采用了引物349F和806R[196]。上游和下游引物用于识别和扩增样品中的目标序列。在454测序仪中，样品之间通过链接在引物上的Tag进行区分。构建的上游引物包括：Linker A、Tag和细菌的28F（或古菌的349F）序列。下游引物包括Linker B、Tag和细菌的519R（或古菌的806R）序列。PCR程序为：95℃5 min，35个循环（95℃30 s，54℃40 s，72℃1 min），72℃延伸10 min。采用Rapid Tip PCR纯化枪头和Ampure beads纯化汇集的DNA，将一些短片段和引物二聚体除去。采用Roche 454 FLX Titanium方法（www.researchandtesting.com）完成测序过程。然后，分析处理所有的测序结果。去掉空载体、测序质量差的序列以及PCR嵌合体序列后，得到古菌和细菌群落的高质量序列。之后，通过Blast功能将这些序列与RDP数据库的已知序列进行比对，对所获得的序列进行分类学分析。(www.daowen.com)
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
