1.破坏脑和脊髓

（1）取青蛙或蟾蜍一只，左手握住其身体，用食指按其头部使之略向前屈，拇指按住其背部，其余三指则握住青蛙或蟾蜍的四肢和腹部。用右手持蛙针，由头端沿中线向尾部划线、凹陷处垂直刺入枕骨大孔，将蛙针尖端转向头端向前插入颅腔，左右摆动，捣毁脑组织。如探针确已插入颅腔，则向各方向摆动时，会有触及颅骨的感觉。

（2）将针撤回至枕骨大孔，但不拔出皮肤，直接向后插入椎管，直达骶部，轻轻转动蛙针，以破坏脊髓。如探针确已在椎管中，则不能左右摆动。蛙针不得穿透椎管，以免损伤内脏，最后拔出蛙针。脑和脊髓破坏完全后，蛙将失去一切反射活动，全身肌肉软瘫。如动物仍有反射动作，则表示破坏不彻底，必须重新破坏。

2.去皮，制作下肢标本

（1）左手握住青蛙或蟾蜍的脊柱，用粗剪刀在前肢腋窝处（骶髂关节水平上2.0 cm处）将脊柱横断，并沿脊柱两侧避开坐骨神经剪开腹壁，此时头、躯干上部及内脏全部下垂，剪除头、全部躯干及内脏组织，留下脊柱和后肢。

（2）左手握住脊柱端，注意不要碰到坐骨神经；右手捏住皮肤边缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。将全部皮肤剥除后，标本放于盛有任氏液的培养皿中。

（3）沿脊柱和耻骨联合的中线，用剪刀将标本纵剖为两半，注意勿损伤坐骨神经。剪好的标本一半置于蛙板上，以制备标本；另一半置于盛有任氏液的培养皿中备用。(www.daowen.com)

3.制备坐骨神经-腓肠肌标本

（1）游离坐骨神经，用玻璃解剖针沿脊柱侧游离坐骨神经。从大腿背面的坐骨神经沟分离出坐骨神经直至腘窝，剪下1～2段与神经相连的脊柱，剪断坐骨神经分支。

（2）分离腓肠肌的跟腱，用线结扎跟腱，在结扎处以下将跟腱剪断。持线提起腓肠肌，用粗剪刀剪去小腿骨和其上的肌肉，再将大腿肌肉剪去，只留长1～2cm的股骨，并将其上的肌肉刮干净，以便在肌动器上固定标本。

4.检验标本活性

用锌铜弓的两端轻轻接触神经，若肌肉产生收缩，则表示标本的机能状态良好。