【摘要】:巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2~3周,多用做原代培养,难以长期生存。),以刺流产生大量的巨噬细胞。每只鼠可产生20~30×106个细胞,其中90%为巨噬细胞。
巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2~3周,多用做原代培养,难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P331、S774A.1、RAW309Cr.l等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。
培养巨噬细胞可用各种方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法最为实用,其法如下:
1.实验前三天,向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤lmL(勿注入肠内!),以刺流产生大量的巨噬细胞。
2.引颈处死小鼠。
3.手提鼠尾将其全浸入70%乙醇中3~5秒。
4.置动物于解剖台,用针头固定四肢,持镊撕开腹部皮肤,但勿伤及腹膜壁,把皮肤拉向上下两侧,暴露出腹膜壁。
5.用70%乙醇擦洗腹膜壁,注射器吸10mL Eagle液注入腹腔中,同时用手指从两侧压揉腹膜壁,使液体在腹腔内流动。(www.daowen.com)
6.用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧,使腹腔中液体集中于针头下吸入针管内。
7.小心拔出针头,把液体注入离心管。
8.4℃下250g离心10分钟后,去上清,加10mL Eagle培养基。
9.计数细胞。每只鼠可产生20~30×106个细胞,其中90%为巨噬细胞。
10.以3×105个贴附细胞/平方厘米接种。
11.接种数小时后,除去培养液,可去除其他白细胞,纯化培养细胞,用Eagle液冲洗1~2次,再加新Eagle培养液置CO2温箱中。
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