神经细胞（神经元）不易培养，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或加入神经生长因子和胶质细胞因子时，可出现一定程度的分化，出现突起等现象，但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。

人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养，不仅能获得生长的胶质细胞，也可形成能传代的二倍体细胞系。一般说来，胶质细胞在培养中生长不稳定，不易自发转化，但对外界因素仍保持很好的敏感性，可用Rous病毒和SV4等诱发转化。

（一）设备

CO2培养箱：恒温5％、10％CO2维持培养液中的pH值。

倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况。

解剖显微镜：用于准确地取材。

常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶。

低温冰箱：-20℃～-80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂。

电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿。

高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械。

过滤器：配制解剖液、培养液，必须过滤后才可使用，以去除细菌。

透压仪，pH剂，天平等。

（二）培养器皿及手术器械

1.培养皿：常用35mm塑料及玻璃皿，解剖取材用15～90mm直径。

2.培养板：24～40孔，可用于开放培养。

3.培养瓶。

4.吸管　常用1、5、10mL，均需泡酸、洗涤、灭菌后方可使用。

5.各类培养液贮存器。

6.小型手术器械。(www.daowen.com)

（三）准备

1.配制培养液

（1）解剖液：以无机盐（去除Ca2+，Mg2+）加葡萄糖配制成PBS缓冲液，保持一定的渗透压和pH值。

（2）基础培养基（MEM）：主要为多种氨基酸，加入葡萄糖，双蒸馏水溶解。

（3）接种培养液：用于胰酶消化后的细胞分散，做成细胞悬液，其成分为MEM含1％谷氨酰胺，另加入10％马血清，当天配制。

（4）维持培养液：接种后24h全部换成此液，后每2周换一次，每次换1/2。其成分为MEM中含5％马血清，1％谷氨酰胺及适量的支持性营养物质。

2.培养基质　常用鼠尾胶、小牛皮胶，多聚赖氨酸，再涂胶。

3.消毒培养皿的备用

4.神经细胞分散培养

（1）选材：常用胚胎动物或新生鼠神经组织。鸡胚常用胚龄6～8d，新生鼠或胎鼠（12～14d）或人胚胎。

（2）取材：脑则取出相应组织，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓则固定于琼脂板上，用小刀将其分成背腹两侧，分别培养。

（3）细胞分离与接种：神经组织用0.125％～0.25％胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接种液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用细口吸管吹打细胞悬液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上层细胞悬液，计数，预置细胞密度，接种于培养皿（1×106），做电生理应为5×105或更低。

（4）抑制胶质细胞生长：培养3～5d后，也有人认为培养7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神经胶质细胞的生长。

（5）观察：接种6～12h，开始贴壁，并有集合现象，细胞生长突起明显，5～7d胶质细胞增生明显，7～10d胶质细胞成片于神经细胞下面，形成地毯，2周时神经细胞生长最丰满，四周晕光明显，一个月后，有些神经细胞开始退化，变形，甚至出现空泡，一般培养2～4周最宜。

但神经细胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能传代，不会有细胞周期，而且随培养时间延长，细胞数量在下降，但胶质细胞可以，神经胶质细胞也可以。在培养过程中，早期9～12d时，有较多的神经细胞死亡，这是第一次死亡阶段，应注意保持条件恒定。在此之后存活下去的细胞一般突起长而多，且相互形成突触。

（6）常用培养细胞实验有：FCM的蛋白总量分析；膜片钳与离子通道的分析；免疫组化分析。但免疫组化分析应注意，由于抗体直接作用于活细胞，不易穿透活细胞，故对核内抗原定位时，首先考虑膜对抗体的通透性问题。常用化学试剂以增加其通透性或采用冰冻方法解决。

在免疫组化中，或其他组织学染色中，常用不同的染色方法以区分不同细胞，如半乳糖脑苷脂对小树突胶质细胞标记明显；GFAP对星形胶质细胞具有特异性染色等。这对研究神经系统中胶质细胞功能具有极大的应用价值。神经胶质细胞以往多被忽视，其在脑血管疾病（如缺血性损伤）、退行性疾病（如AD、PD）、损伤后胶质细胞的填充等具有不可忽视的作用。它也是神经细胞功能和营养支持的物质基础。