（一）基本原理

斑点杂交法是将被检标本点到膜上，烘烤固定。为使点样准确方便，有多种多管吸印仪（manifolds），如Minifold I和II、Bio-Dot（Bio-Rad）和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状，反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的膜就可以进行杂交。

（二）主要步骤

1.DNA斑点杂交

（1）先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。

（2）将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。

（3）用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上。每个样品一般点50μL（2～10μg DNA）。

（4）将膜烘干，密封保存备用。(www.daowen.com)

2.RNA斑点杂交　与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化）。方法是将RNA溶于5μLDEPC水，加15μL甲醛/SSC缓冲液（10×SSC中含0.15mol/L甲醛）使RNA变性。然后取5～8μL点样于处理好的滤膜上，烘干。

整个RNA实验中，要防止激活内源性RNase，有许多种预防措施，有一种是在样品中加入核糖核苷氧矾基复合物。

3.完整细胞斑点杂交　应用类似检测细菌菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测。将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到少至5pg的Epstein-Barr病毒DNA。

（三）优缺点

总的来说，这三种方法耗时短，可做半定量分析，一张膜上可同时检测多个样品。

1.RNA斑点杂交中标本处理技术可以简化，不用提取和纯化RNA，用含0.5％Nonidet P40的低渗缓冲液对多种动物细胞作简单处理，离心去掉细胞核和细胞碎片，就得到基本不带DNA而富含RNA的细胞质提取物，这一粗RNA在高盐下用甲醛变性，不需加工直接点到硝酸纤维素膜上。本法可以快速检测大量标本。

2.完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为它是使细胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法还高，又不影响与32P标记的探针杂交。但它不适于非放射性标记探针，因为DNA纯度不够。