手性色谱法是测定对映体组成的最有效的方法之一，色谱固定或流动相中的手性物质能将对映体直接或间接分离完全，从而确定各对映体的组成。现在对映体在非外消旋体的手性固定相上的直接分离已被广泛用于对映体的组成测定，这种用于GC和HPLC的非外消旋型手性固定相现已商品化。该方法的缺点是手性柱或手性试剂价格昂贵。

1.手性气相色谱法

手性气相色谱法（GC）是测定对映体混合物组成的受青睐的分析方法，这种灵敏的方法不受痕量杂质影响，操作方便快捷。此法使用含有高对映体纯的拆分辅助剂的手性固定相。要分析的对映体与固定相发生快捷和可逆的非对映体的相互作用，因此可以用不同的速度被洗脱。其分离度取决于分析样品与手性固定相的相互作用，包括两种方式：①通过氢键的对映体拆分，固定相多为手性酰胺衍生物。②通过手性金属螯合的对映体拆分，如樟脑酸衍生物与过度金属或镧系金属的配合物。

2.手性液相色谱法

用GC分析对映体组成是一种有效的方法，然而它仅限于挥发性的和热稳定性的化合物，这一局限性可通过使用手性固定相或移动相的HPLC得到补充。

3.核磁共振光谱法（NMR）(www.daowen.com)

在手性溶剂、手性衍生试剂或手性位移试剂作用下，对映体分子的化学位移不同，据此可测定各对映体的组成情况。

（1）用手性试剂或手性溶剂试剂。在手性试剂中或手性溶剂试剂存在情况下，由于被分析的化合物和手性环境的非对映性的相互作用，其NMR谱的化学位移不同，从而可测定化合物的对映体的组成。如区分外消旋的2，2，2-三氟-1-苯基乙醇的两个对映体的第一个实例是通过（-）-α-甲基苄胺中记录其19 F NMR谱实现的。

（2）用手性位移试剂。镧系金属络合物可视作弱路易斯酸，在非极性试剂中（CDCl3、CCl4、CS2）中这些顺磁性的盐能和Lewis碱，特别是那些含有孤对电子的碱，如酰胺、胺、酯等结合，结果质子和其他核相对于那些未络合底物的位置而言，通常受到去屏蔽的作用，并且这些核的化学位移改变了。

（3）用手性衍生化试剂。手性衍生化试剂是一对映体纯的试剂，它用于将样品转化为相应的非对映体，后者可用NMR谱识别。1973年，Mosher报道了（R）-型和（S）-型的试剂α-甲氧基-α-三氟甲基-α-苯基乙酸，它的酰氯与手性醇生成的非对映体混合物称为MTPA-酯或Mosher酯，可通过测定该衍生物质在CF3中19 F的NMR谱或CH3O的H 1 NMR谱的不等价性来确定醇的对映体组成。