【摘要】:H2N-MSNs-PEI-FA的荧光标记:将25mg H2N-MSNs-PEIFA超声分散于2mL的DMSO中,随后加入1mg FITC,混合均匀,使得载体中氨基与FITC的异硫氰基团发生共价反应,静置24h后,13 000rpm离心20min,弃上清液,沉淀使用PBS洗涤4次,分散于一定量体积的PBS中待用。
H2N-MSNs-PEI-FA的荧光标记:将25mg H2N-MSNs-PEIFA超声分散于2mL的DMSO中,随后加入1mg FITC,混合均匀,使得载体中氨基与FITC的异硫氰基团发生共价反应,静置24h后,13 000rpm离心20min,弃上清液,沉淀使用PBS洗涤4次,分散于一定量体积的PBS中待用。
流式检测细胞吞噬情况:本章所选用的癌细胞系是Hela细胞,培养基为含有10%胎牛血清和1%双抗的DMEM,将Hela细胞以每孔2.0×105的细胞密度接种于6孔板,每孔体积为2mL,在37℃、5%CO2及饱和湿度条件下,培养24h使细胞贴壁牢固,吸去培养基,加入含有FA(4mM)的DMEM培养基1mL,对照组加入1mL的DMEM培养基,然后放入培养箱继续培养30min,随后加入1mL DMEM混悬的FITC标记的H2NMSNs-PEI-FA(300μg/mL),继续培养2h,弃去培养基,使用不含EDTA的胰酶消化贴壁细胞1~2min,加入1mL DMEM培养基终止消化,随后收集细胞,离心(2 000rpm,5min),弃上清,细胞沉淀使用PBS洗涤两次并收集10~50万个细胞;加入500μL的PBS悬浮细胞,混匀后在1h内,使用流式细胞仪(FACS)观察和检测,每个样品收集1万个细胞。(www.daowen.com)
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