为了研究H（2）S清除酪氨酸自由基（TyrO·）和色氨酸自由基（TrpN·）的能力，本章在O2饱和的条件下，使用266nm激光闪光光解研究H（2）S与两种氨基酸自由基之间的反应。在266nm激光脉冲激发下，两种氨基酸发生光电离反应生成相应的氨基酸自由基（TyrO·和TrpN·）和［136，137，174］，O2的饱和能够保证得到纯净的氨基酸自由基的动力学衰减曲线。

TyrO·+和TrpN·+的pKa分别在为4.3和2.0［175，176］，因此在所考察的pH值范围内，它们是以TyrO·和TrpN·的形式存在。TyrO·的特征吸收峰位置在390nm和410nm［138，139］，因此本章监测410nm处的动力学衰减用于研究TyrO·与H（2）S之间的反应。在pH=7.2的条件下，266nm激光闪光光解O2饱和的Tyr和Na2S水溶液所得到的动力学衰减曲线表明（图7-5），H（2）S能够加快TyrO·在410nm处的动力学衰减，这说明TyrO·与H（2）S之间发生了反应。按照公式（2-13），通过线性拟合在不同Na2S浓度下TyrO·在410nm处的kobs与相应Na2S浓度值，本章分别得到了在pH=6.0，7.2和8.5条件下TyrO·与H（2）S的反应速率常数（表7-2）。

图7-5　在pH=7.2和O2饱和的条件下，266nm激光闪光光解Tyr（0.25mM）和不同浓度Na2S（0mM和4mM）的水溶液所得到的在410nm处的动力学衰减曲线。插图：不同Na2S浓度下TyrO·在410nm处的kobs与相应Na2S浓度值之间的线性拟合曲线

265nm和245nm激光闪光光解Trp水溶液均表明，Trp不仅能够发生光电离反应生成和以N为中心的Trp中性自由基（TrpN·，λmax=510nm），而且Trp也能够发生光激发反应生成三重激发态［136，137］。O2能够清除和猝灭激发三重态，进而得到TrpN·的纯净吸收。分别在三种pH值条件下，266nm激光闪光光解O2饱和的Trp和Na2S水溶液所得到的动力学衰减曲线表明，H（2）S也能够加快TrpN·在510nm处的动力学衰减（图7-6），说明H（2）S能够清除TrpN·。按照公式（2-13），通过线性拟合在不同Na2S浓度下TrpN·在510nm处的kobs与相应Na2S浓度值，本章分别得到了在pH=6.0，7.2和8.5条件下TrpN·与H（2）S的反应速率常数（表7-2）。(www.daowen.com)

图7-6　在pH=7.2和O2饱和的条件下，266nm激光闪光光解Trp（0.5mM）和不同浓度Na2S（0mM，2mM和4mM）的水溶液所得到的在510nm处的动力学衰减曲线。插图：不同Na2S浓度下TrpN·在510nm处的kobs与相应Na2S浓度值之间的线性拟合曲线

ROS是人体内普遍存在的活性物质，自由氨基酸或者蛋白质的氨基酸残基很容易受到人体内ROS的氧化损伤。其中酪氨酸和色氨酸以及它们的蛋白质残基是不同形式ROS进攻的主要目标［135］。一些抗氧化剂能够与TyrO·和TrpN·以及蛋白质残基中的TyrO·和TrpN·发生电子转移反应，从而清除产生的氨基酸和蛋白质自由基，修复氧化损伤［133，177-179］。H（2）S与TyrO·和TrpN·之间的反应表明，H（2）S也具备清除氨基酸自由基的能力。考虑到H（2）S较强的还原能力，H（2）S很有可能也是通过电子转移的途径清除TyrO·和TrpN·。