为了考察ROH·+是否具有损伤蛋白质的潜力，本章研究了ROH·+对色氨酸（Trp），酪氨酸（Tyr），L-半胱氨酸（Cys）和溶菌酶的反应活性。

在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ROH和Trp的微乳体系所得到的动力学衰减曲线表明，Trp的存在能够加快ROH·+在590nm处的动力学衰减（图4-16A），说明ROH·+能够和Trp发生反应。同样，将Trp浓度值与对应Trp浓度下ROH·+在590nm处的kobs按照公式（2-13）进行线性拟合（图4-16插图），本章计算出它们之间的反应速率常数（表4-1）。但是，在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ROH和Trp的微乳体系所得到的不同时刻的瞬态吸收谱图上很难找到Trp·（λmax=530nm［136，137］）的瞬态吸收（图4-16B），因此，无法判断ROH·+和Trp之间的反应类型。

在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ROH和Cys的微乳体系所得到的瞬态吸收谱图表明，随着ROH·+的特征吸收峰的衰减，在380nm处出现一个新的瞬态吸收峰（图4-17A），590nm处的衰减过程与380nm处的生成过程几乎是同步的（图4-17B），因此得出ROH·+与Cys发生了反应，生成了在380nm具有吸收的瞬态物质。对380nm处瞬态产物的归属是非常困难的，一方面，如果ROH·+与Cys发生了电子转移反应，所生成的巯基阳离子自由基（R-S·+）能够与邻近的S，O或者N上的未成键电子对络合，形成相应的含硫三电子键自由基（λmax=380nm）［156-158］；另一方面，由于ROH·+与NaN3和卤族阴离子的加成产物的特征吸收均是在370～390nm之间，因此，380nm处的瞬态产物也有可能是ROH·+与Cys之间的加成产物。

图4-16　（A）在pH=7.4条件下，355nm激光闪光光解ROH（0.05mM）和不同浓度Trp的微乳体系所得到的ROH·+在590nm的动力学衰减曲线。插图：ROH·+在590nm的kobs与相应Trp浓度值之间的线性拟合。（B）在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ROH（0.05mM）和Trp（0.96mM）的微乳体系后在3μs（），5μs（），10μs（）和20μs（）的瞬态吸收谱图(www.daowen.com)

图4-17　（A）在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ROH（0.06mM）和Cys（10mM）的微乳体系后分别在0.1μs（），3μs（）和8μs（）的瞬态吸收谱图。（B）在相同条件下所得到的在380nm和590nm的动力学衰减曲线。插图：在pH=7.4条件下，355nm激光闪光光解ROH（0.05mM）和不同浓度Cys的微乳体系所得到的ROH·+在590nm的kobs与相应Cys浓度值之间的线性拟合

通过公式（2-13）本文计算出了ROH·+与Cys和Lyso之间的反应速率常数（表4-1），但是无法证明ROH·+能够与Tyr发生反应。同样，本文无法表征ROH·+和Lyso之间的反应机理。