色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）是许多蛋白质的重要组成部分，蛋白质中这两种氨基酸的残基也是ROS损伤的主要目标［135］。溶菌酶含有3个Tyr残基和6个Trp残基，其中4个Trp残基暴露在溶剂中。许多研究表明，ROS与Lyso的反应是通过与Lyso的Tyr和Trp残基的作用进行的［130-131］。既然Lyso能够与ATRA·+反应，那么ATRA·+也应该与Tyr和Trp反应。为此，本书单独考察了ATRA·+与Tyr和Trp的反应活性。

在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ATRA和Trp的微乳体系所得到的动力学衰减曲线表明，Trp的存在能够加快ATRA·+在590nm处的动力学衰减（图3-14），说明ATRA·+和Trp之间发生了反应。所得到的瞬态吸收谱图表明，随着ATRA·+的衰减完成，510nm处能够观察到一个微弱的宽吸收带（图3-14）。Trp·+的pKa约为4.8，因此，在pH=7.4条件下，如果Trp被单电子氧化，所生成的产物应是一个以N为中心的中性自由基（Trp·），Trp·的特征吸收在510nm附近［136，137］，因此，推测ATRA·+可能通过电子转移的途径氧化Trp生成Trp·，但是由于在这里Trp·的吸收很弱，即使通过减谱的方法，也很难从动力学衰减曲线上看出其动力学生成过程。

图3-14　在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ATRA（0.06mM）和Trp（4mM）的微乳体系后分别在0.5μs（），2μs（）和8μs（）时刻的瞬态吸收谱图。插图：ATRA·+在590nm处的动力学衰减受Trp（4mM）的影响

与Trp相似，Tyr的加入也能够加快ATRA·+在590nm处的动力学衰减，但是从瞬态吸收谱图上，无法找到酪氨酸中性自由基（Tyr·，λmax=390和410nm）的特征吸收峰［138，139］。通过式（2-13）本文分别计算出了ATRA·+与Trp和Tyr之间的反应速率常数（表3-1），从速率常数的角度看，ATRA·+与Lyso，Trp和Tyr之间的速率常数很接近，这从一定程度上说明了ATRA·+与Lyso的反应可能是通过与Lyso的Tyr和Trp残基作用进行的。

在中性pH值下，Tyr和Trp被单电子氧化或者发生光电离之后，会生成相应的中性自由基：Trp·（λmax=510nm）和Tyr·（λmax=390和410nm）［136-139］。在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ATRA和Lyso的微乳体系所得到的不同时刻瞬态吸收谱图上很难找到与Trp·+和Tyr·+相对应的瞬态吸收（图3-15），因此，本文无法判断ATRA·+和Lyso之间的反应是否是电子转移的过程。除此之外，本章得到了半胱氨酸与ATRA·+的反应速度常数（表3-1）。(www.daowen.com)

表3-1　在pH=7.4条件下，ATRA·+与所选物质的反应速率常数（单位：M-1s-1）

图3-15　在pH=7.4和O2饱和的条件下，355nm激光闪光光解ATRA（0.06mM）和Lyso（1.2mM）的微乳体系后分别在0.5μs（），5μs（和20μs（）时刻所得的瞬态吸收谱图