【摘要】：根据Lambert-Beer定律，在ATRA和其脱质子形式都具有吸收的波段内的任一波长（λ固定）处的OD值等于ATRA两种形式的吸光度之和：在式（3-1）中，［ATRA-］是ATRA-的摩尔浓度，［ATRA］是ATRA的摩尔浓度；ε1和ε2分别是ATRA-和ATRA在λ固定处的摩尔消光系数。在该实验条件下，L，a，ε1和ε2是常数，由此可以看出，在不同pH值条件下，OD值正比于ATRA的脱质子化程度。选取25个不同的λ固定，经拟合得到25个pKa值，取平均值6.98作为ATRA在微乳中的pKa值：
根据Lambert-Beer定律，在ATRA和其脱质子形式（ATRA-）都具有吸收的波段内的任一波长（λ固定）处的OD值等于ATRA两种形式的吸光度之和（式（3-1））：
在式（3-1）中，［ATRA-］是ATRA-的摩尔浓度，［ATRA］是ATRA的摩尔浓度；ε1和ε2分别是ATRA-和ATRA在λ固定处的摩尔消光系数。在该实验条件下，L，a，ε1和ε2是常数，由此可以看出，在不同pH值条件下，OD值正比于ATRA的脱质子化程度。然后由公式（3-1）和Henderson-Hasselbach方程可以推导出OD与pH之间的关系式（3-2）：
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由（3-2）式中可以看出，ε1=ε2时的波长位置是ATRA和ATRA-的等吸收点，在352nm附近（图3-2），使用公式（3-2）计算pKa值时，尽量避开在352nm处取值，因为在352nm附近OD值随pH值的变化不明显，计算所得到的pKa值误差较大。在λ固定处，将不同pH值和相应pH下所对应的OD值按照式（3-2）使用origin7.5进行拟合，便可得到一个pKa值。选取25个不同的λ固定，经拟合得到25个pKa值，取平均值6.98作为ATRA在微乳中的pKa值（式（3-3））：
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