理论教育 实验室常用缓冲溶液的配制方法

实验室常用缓冲溶液的配制方法

时间:2023-11-01 理论教育 版权反馈
【摘要】:分装后高温高压灭菌。Tris-HCl溶液的pH值随温度的变化差异较大,温度每升高1℃,pH大约降低0.03个单位,配制及使用时需注意。

实验室常用缓冲溶液的配制方法

1.1mol/LTris-HCl缓冲液

称取121.1g 的Tris(三羟甲基氨基甲烷),溶于800mL去离子水中,按所需pH值在搅拌条件下加入相应体积浓盐酸(11.6mol/L)。

待溶液冷却至室温,用稀盐酸准确调定pH值后,再加入去离子水定容至1 000mL。分装后高温高压灭菌。Tris-HCl溶液的pH值随温度的变化差异较大,温度每升高1℃,pH大约降低0.03个单位,配制及使用时需注意。

2.0.5mol/LEDTA(pH8.0)溶液

称取Na2 EDTA·2H2O(二水乙二胺四乙酸二钠盐)186.1g,加入800mL去离子水中,磁力搅拌器搅拌,用NaOH调pH至8.0,去离子水定容至1 000mL。

注意:只有当pH值接近8.0时,Na2 EDTA·2H2O 才能完全溶解。调pH值时可先用固体NaOH(约需20g),也可用10mol/L的NaOH溶液,大约使用70mL。待Na2EDTA·2H2O完全溶解后,再用低浓度NaOH准确调至pH8.0。分装后高压灭菌,室温保存。

3.TE Buffer

取1mL1mol/LTris-HCl(pH7.4、7.6、8.0),与0.2mLpH8.0的0.5mol/LEDTA溶液混合后,用去离子水定容至100mL,高温高压灭菌,室温保存(终浓度:10mmol/LTris-HCl+1mmol/LEDTA,pH7.4、7.6、8.0)。

4.50×TAE(Tris-乙酸)缓冲液

称取242.2g Tris碱加入约800mL去离子水中,充分搅拌溶解,再加入57.1mL冰乙酸和100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0),搅拌混匀,加去离子水定容至1 000mL。室温保存(终浓度:2mol/LTris+1mol/L乙酸+100mmol/LEDTA)。

5.5×TBE(Tris-硼酸)缓冲液

称取54g Tris碱和27.5g 硼酸加入约800mL去离子水中,充分搅拌溶解,再加入20mL0.5mol/LEDTA(pH8.0),搅拌混匀,加去离子水定容至1 000mL。室温保存(终浓度:445mmol/LTris+445mmol/L硼酸+10mmol/LEDTA)。

6.0.2mol/L磷酸钠缓冲液

(1)Na2HPO4·2H2O 的相对分子质量为178.05;0.2mol/L溶液含35.61g/L。

(2)Na2HPO4·12H2O 的相对分子质量为358.22;0.2mol/L溶液含71.64g/L。

(3)NaH2PO4·H2O 的相对分子质量为138.01;0.2mol/L溶液含27.6g/L。

(4)NaH2PO4·2H2O 的相对分子质量为156.03;0.2mol/L溶液含31.21g/L。

7.1/15mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液

(1)Na2HPO4·2H2O的相对分子质量为178.05;1/15mol/L溶液含11.876g/L。

(2)Na2HPO4·12H2O的相对分子质量为358.22;1/15mol/L溶液含23.88g/L。

(3)KH2PO4的相对分子质量为136.09;1/15mol/L溶液含9.078g/L。

8.磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液(Mcllvaine液)

(1)Na2HPO4的相对分子质量为141.48;0.2mol/L溶液含28.40g/L。

(2)Na2HPO4·2H2O的相对分子质量为178.05;0.2mol/L溶液含35.61g/L。

(3)C6H8O7·H2O的相对分子质量为210.14;0.1mol/L溶液为21.01g/L。

9.0.1mol/L磷酸钾缓冲液

(1)K2HPO4 的相对分子质量为174.18;0.1mol/L溶液含17.42g/L。

(2)KH2PO4的相对分子质量为136.09;0.1mol/L溶液含13.61g/L。

10.0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液(www.daowen.com)

乙酸钠(CH3COONa·3H2O)的相对分子质量为136.09;0.2mol/L溶液含27.22g/L。

11.0.05mol/LTris-盐酸缓冲溶液

三羟甲基氨基甲烷(Tris)的相对分子质量为121.14;0.1mol/L溶液含12.114g/L。

注:Tris溶液可从空气中吸收CO2,保存时注意密封性。溶液温度每升高1℃,pH降低0.03。

12.硼酸-硼砂缓冲液(0.2mol/L硼酸根)

(1)硼砂(Na2B4O7·10H2O)的相对分子质量为381.43;0.05mol/L溶液(=0.2mol/L硼酸根)含19.07g/L。

(2)硼酸(H5BO3)的相对分子质量为61.84;0.2mol/L溶液含12.37g/L。

13.0.1mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液

(1)Na2CO3 的相对分子质量为105.49;0.1mol/L溶液含10.6g/L。

(2)Na2CO3·10H2O 的相对分子质量为286.2;0.1mol/L溶液含28.62g/L。

(3)NaHCO3 的相对分子质量为84.0;0.1mol/L溶液含8.40g/L。

注:Ca2+、Mg2+存在时不得使用。

14.0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液

(1)柠檬酸(C6H8O7·H2O)的相对分子质量为210.14;0.1mol/L溶液含21.01g/L。(2)柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)的相对分子量为294.12;0.1mol/L溶液含29.41g/L。

15.巴比妥钠-盐酸缓冲液

巴比妥钠的相对分子质量为206.18;0.04mol/L溶液含8.25g/L。

16.0.05mol/L甘氨酸-盐酸缓冲液

甘氨酸的相对分子质量为75.07;0.2mol/L溶液含15.01g/L。

17.硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05mol/L硼酸根)

硼砂(Na2B4O7·10H2O)的相对分子质量为381.43;0.05mol/L溶液含19.07g/L。

18.0.05mol/L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液

甘氨酸的相对分子质量为75.07;0.2mol/L溶液含15.01g/L。

19.常用平衡盐溶液

注:(1)将CaCl2用100mL纯化水单独溶解。

(2)将酚红用7.4% NaHCO3(或Na2HPO4·H2O)溶液单独溶解。

(3)平衡盐溶液配好后,在0.055 MPa(111℃)条件下高压灭菌30min,置于4℃冰箱保存。

(4)使用前,用已灭菌的7.4%NaHCO3溶液调节pH至7.2~7.4。

(5)上述PBS溶液中无二价阳离子,如果需要,可在配方中补充1mmol/LCaCl2和0.5mmol/LMgCl2

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