理论教育 遗传学实验教程-实验室常用染色液配制

遗传学实验教程-实验室常用染色液配制

时间:2023-11-01 理论教育 版权反馈
【摘要】:改良苯酚品红染液普遍适用于植物细胞组织的染色体压片染色。染色液中含少量亚铁离子,可明显增强洋红的染色能力。此液需经1~2个月的氧化成熟。若急用,临时配制时可加入碘酸钠使其氧化成熟。在溶液冷却到50℃时过滤,滤液中加入10mL1mol/L的盐酸。用时以磷酸盐缓冲液稀释。活细胞染色后呈白色透明,死细胞呈深蓝色。

遗传学实验教程-实验室常用染色液配制

1.改良苯酚品红(石炭酸品红、卡宝品红)染液

母液A:称取3.0g碱性品红溶解于100mL70%乙醇中(可长期保存)。

母液B:量取10mL母液A加入90mL5%苯酚水溶液中混匀(此液限于2周内使用)。

苯酚品红染液:量取45mL母液B,加入6mL冰乙酸和6mL37%甲醛,混合均匀。

改良苯酚品红染液:量取20mL苯酚品红染液,加入180mL45%冰乙酸中,然后加入3.6g山梨醇,溶解混匀,室温下静置2周后可长期使用,贮存于棕色瓶中。

由于苯酚品红染液含甲醛较多,可使原生质体硬化而保持其固有形态,因此适合于植物细胞原生质体培养中的核分裂和细胞核染色。也正因为其甲醛含量较多,不能使细胞组织软化,所以不太适合植物细胞组织的染色体压片染色。

改良苯酚品红染液普遍适用于植物细胞组织的染色体压片染色。此液刚配制后可立即使用,但染色较差,放置2周后染色能力显著增强,而且放置时间越久,染色效果越好。

2.乙酸-洋红染液

量取45mL冰乙酸,加入盛有55mL蒸馏水的三角瓶中,加热至沸后移走火源,慢慢加入1g洋红粉末(防止溅沸),并不断搅拌使其溶解,然后再加热煮沸1~2min,待冷却后加入2%硫酸亚铁(铁矾)溶液数滴,直到染液变为暗红色不产生沉淀为止。或者用一根细线悬一枚生锈的小铁钉完全浸入染液中,过1min取出。染色液中含少量亚铁离子,可明显增强洋红的染色能力。染液配好后室温下静置12h,然后过滤,滤液贮存于棕色瓶中,避免阳光直射。

3.丙酸-洋红染液

丙酸-洋红染液与乙酸-洋红染液的配制过程相同,仅用45%的丙酸代替45%的乙酸。丙酸比乙酸更易溶解洋红,而细胞质着色比乙酸-洋红染液浅。

4.乙酸-地衣红染液

量取45mL冰乙酸,加热至近于沸腾,缓慢加入1~2g地衣红粉末,搅拌溶解,冷却后加入55mL蒸馏水,混匀,过滤,贮存在棕色瓶里。

5.苏木精染液

称取0.5g苏木精,加入10mL95%乙醇中使其溶解,再加入90mL蒸馏水。此液需经1~2个月的氧化成熟。在瓶口盖数层纱布或塞一棉塞以保持通气。使用时过滤。此液可直接使用或用蒸馏水稀释一倍后使用,亦可反复使用数次(每次均需过滤)。若急用,临时配制时可加入碘酸钠使其氧化成熟。0.5g苏木精需配加0.1g碘酸钠,溶解后可使用。

6.席夫(Schiff)试剂

称取0.5g 碱性品红,加入100mL煮沸的蒸馏水中,边搅拌边加热,使其充分溶解。在溶液冷却到50℃时过滤,滤液中加入10mL1mol/L的盐酸。再冷却至20~25℃时,加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)或无水亚硫酸氢钠(NaHSO3)。把溶液盛入棕色瓶内,置于黑暗中12~24h。此时染液应呈淡黄色或白色,若颜色过深可加入适量活性炭,轻摇1min,过滤后在棕色瓶内贮存于暗处。在使用时勿让染液长时间暴露在空气或光下(瓶外最好黑纸遮光)。如染液变成红色,则失去染色能力。

7.亚甲基蓝(美蓝)染液

称取0.5g亚甲基蓝,溶于30mL95%乙醇中,然后加入100mL0.01%氢氧化钾溶液中,保存于棕色瓶内。

8.Giemsa染液

量取33mL甘油,先将少量加入研钵中,称取0.5g Giemsa 粉末置于研钵充分研细,再倒入剩余甘油中,在56℃恒温箱中保温1.5~2h,然后再加入33mL甲醇,充分搅拌,滤纸过滤后,作为原液保持于棕色瓶中。用时以磷酸盐缓冲液稀释。此原液贮存数月后染色效果更好。

9.伊红染液

称取1g伊红,溶于100mL蒸馏水(或70%乙醇)中,即为1%伊红水(乙醇)溶液。

10.甲基蓝染液

称取1g甲基蓝,溶于30mL70%乙醇中,再加入70mL蒸馏水,贮存于棕色瓶。(www.daowen.com)

11.龙胆紫染液

量取30mL冰乙酸加热至40℃,加入0.75g龙胆紫,搅拌溶解,然后加入70mL蒸馏水,过滤后贮存于棕色瓶内。

12.台蓝染液

称取2g台朌蓝置于研钵中,加入几滴蒸馏水研成细末后,溶于100mL蒸馏水中,过滤,棕色瓶保存。活细胞染色后呈白色透明,死细胞呈深蓝色。

13.甲基绿染液

称取0.11g甲基绿溶于25mL0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中,调pH至6.8,作为贮存液。使用时,取2mL贮存液加入50mL0.1mol/L的磷酸盐缓冲液中,调pH至6.8即可。本染液能染细胞核,还可用来染木质化细胞壁。

14.乙酸-铁矾-苏木精染液

称取0.5g苏木精溶于100mL45%冰乙酸中,用前取3~5mL,用45%冰乙酸稀释1~2倍,加入铁矾饱和液(溶于45%乙酸中)1~2滴,染色液由棕黄色变为紫色,应立即使用,不能长期保存。

15.硫堇紫染液

硫堇紫原液:称取1g 硫堇溶解于100mL50%乙醇中。

Michaelis缓冲液(pH5.7±0.2):称取9.7g乙酸钠(NaAc·3H2O)和14.7g巴比妥钠依次溶于500mL煮沸后的蒸馏水中。

硫堇紫染液:量取28mLMichaelis缓冲液和32mL0.1mol/L盐酸,再加入硫堇原液40mL,混匀。

16.Macllvaine’s缓冲液(pH6.0)

A液(0.1mol/L柠檬酸溶液):称取21.0g柠檬酸(C6H8O7·H2O),溶于1 000mL蒸馏水中。

B液(0.2mol/L磷酸氢二钠溶液):称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O),溶于1 000mL蒸馏水中。

工作液:量取A液73.3mL,与B液126.7mL混合(以200mL计),即可得pH6.0的Macllvaine’s缓冲液。

17.盐酸喹吖因染液

称取0.05g盐酸喹吖因,溶于10mLMacllvaine’s缓冲液,即为0.5%盐酸喹吖因荧光染液。贮存于棕色瓶,于4℃冰箱保存。

18.芥子喹吖因染液

将35.3mL0.1mol/L柠檬酸(C6H8O7)溶液加入164.7mL0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)溶液中,配制成总量为200mL的缓冲液,调pH至7.0;然后将一份芥子喹吖因水溶液加入缓冲液中,使其最终质量浓度为50μg/mL。

19.乳酸-乙酸-地衣红染液

用70%的乳酸溶液按1∶1比例稀释乙酸-地衣红染液,过滤后即可使用。

20.瑞特氏(Wright)染液

称取0.1g瑞特染色粉,量取60mL甲醇。先用少量甲醇在研钵中研磨染色粉,直至染料完全溶解后,和剩余甲醇一起贮存于棕色瓶,室温下保存7d后即可使用。新配制的染液偏碱性,放置后可呈酸性,保存时间愈久染色效果愈佳。需注意的是,保存中要塞紧瓶盖,否则甲醇可被氧化产生甲酸。如果久存的染液染色效果变差,首先应考虑是甲酸所致。在染液中切忌混入水滴,否则会产生沉淀,直接影响染色效果。

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