理论教育 遗传学实验教程-实验室常用溶液配制

遗传学实验教程-实验室常用溶液配制

时间:2023-11-01 理论教育 版权反馈
【摘要】:溶解后于沸水浴中煮15min,使DNA酶失活。缓慢冷却至室温,再用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,分装后于-20℃保存。或称取10mg溴化乙锭,置于离心管中,加入1mL蒸馏水,旋涡混合,直至溴化乙锭充分溶解。使用时所需各浓度秋水仙素液用蒸馏水稀释母液即可。

遗传学实验教程-实验室常用溶液配制

1.常用盐酸溶液

2.2mol/LNaOH溶液

称取8g 氢氧化钠加入约80mL蒸馏水中,缓慢加入,边加边搅拌。待氢氧化钠完全溶解后,用蒸馏水定容至100mL,室温保存。

3.5mol/LNaCl溶液

称取29.2g氯化钠溶于约80mL蒸馏水中,定容至100mL,室温保存。

4.5mol/L乙酸钾溶液(pH4.8)

称取29.4g乙酸钾(C2H3KO2)溶于60mL蒸馏水中,溶解后再加入115mL冰乙酸及28.5mL蒸馏水,即为5mol/L乙酸钾溶液。

5.1mol/L氯化钾溶液

称取7.46g氯化钾(KCl)溶于约80mL蒸馏水中,再加水定容到100mL。

6.1mol/L氯化镁溶液

称取20.3g氯化镁(MgCl2·6H2O)溶于约80mL蒸馏水中,再加水定容到100mL。

7.10%SDS(十二烷基硫酸钠)

称取10g十二烷基硫酸钠(SDS)慢慢加入约90mL蒸馏水中,于42~68℃加热搅拌直至完全溶解。然后用1mol/LHCl调pH至7.2,再用蒸馏水定容至100mL。

8.20%PEG 8 000/2.5mol/LNaCl

称取20g聚乙二醇8 000,加入50mL5mol/L氯化钠溶液中(或14.6g氯化钠溶于50mL蒸馏水),再用蒸馏水定容至100mL,常温保存。

9.3mol/L乙酸钠(pH5.2、7.0)溶液

称取40.8g乙酸钠(NaAc·3H2O)溶于约80mL去离子水中,加热搅拌溶解,用稀冰乙酸调pH至5.2或7.0,再加去离子水定容至100mL,高压灭菌,4℃保存。

10.10mol/L乙酸铵溶液

称取77.1g乙酸铵加入约80mL去离子水中,充分搅拌溶解,再加去离子水定容至100mL,然后用0.22μm滤膜过滤除菌。密封瓶口,室温保存。乙酸铵受热易分解,不能高温高压灭菌。

11.苯酚-氯仿-异戊醇

将氯仿与异戊醇按24∶1混合均匀后,再与Tris-HCl平衡酚等体积混合,贮于棕色玻璃瓶中,4℃保存。

从核酸样品中除去蛋白质时经常使用苯酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)混合物。氯仿可使蛋白质变性并有助于水相与有机相分离,异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

12.10mg/mL蛋白酶K(proteinase K)

称取100mg蛋白酶K加入9.0mL去离子水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。再加去离子水定容至10mL,分装于离心管,-20℃保存。

13.10mg/mLRNase(RNase-free DNase)

称取10mgRNA酶溶于1mL10mmol/L乙酸钠水溶液中(pH5.0)。溶解后于沸水浴中煮15min,使DNA酶失活。缓慢冷却至室温,再用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,分装后于-20℃保存。或者100mg RNA酶溶于10mL的10mmol/LTris-HCl(pH7.5)和15mmol/LNaCl溶液中,沸水浴中煮15min,分装,-20℃保存。(配制过程需要戴手套。)

14.0.25%胰蛋白酶溶液

称取2.5g胰蛋白酶,溶于足量0.85%氯化钠溶液中并定容至1 000mL。

15.2mol/L山梨醇(糖)

称取36.4g山梨醇(糖)溶于约80mL蒸馏水中,然后定容至100mL。

16.20mg/mLX-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷)

称取1g X-Gal置于50mL塑料离心管中,加入40mL二甲基甲酰胺(DMF),充分溶解后定容至50mL,分装于离心管并用铝箔包裹后,-20℃保存。

17.1mol/LDTT(二硫苏糖醇)

称取3.09g二硫苏糖醇,溶解于20mL0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)中,用滤膜过滤除菌后分装于离心管,-20℃保存

18.10mg/mL溴化乙锭(EB)

小心地称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加入100mL蒸馏水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解后,用离心管分装。或称取10mg溴化乙锭,置于离心管中,加入1mL蒸馏水,旋涡混合,直至溴化乙锭充分溶解。4℃避光保存。溴化乙锭工作浓度为0.5μg/mL。

19.10mmol/LATP

称取121mg Na2ATP·3H2O,加入50mL的塑料离心管内,然后加入20mL25mmol/LTris-HCl(pH8.0),充分搅拌溶解。用离心管分装后,-20℃保存。

20.1%秋水仙素溶液

称取1g秋水仙素粉末,溶于少量无水乙醇中,加入蒸馏水定容至100mL,即配成1%秋水仙素母液。用棕色瓶(再用黑纸包装)贮存于4℃冰箱。使用时所需各浓度秋水仙素液用蒸馏水稀释母液即可。

21.常用生理盐水溶液

22.低渗液(0.075mol/LKCl)

称取5.6g氯化钾溶于足量去离子水中,并定容至1 000mL。

23.等渗液

称取2.2g柠檬酸钠溶于约80mL去离子水中,再定容至100mL。

24.20×SSC溶液(3mol/LNaCl+0.3mol/L柠檬酸钠)

称取175.3g氯化钠和88.2g柠檬酸钠,溶于约800mL蒸馏水中,用10mmol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.0,再加蒸馏水定容至1 000mL,分装后高温高压灭菌。

25.20×SSPE溶液(3mol/LNaCl+0.3mol/LNaH2PO4+0.02mol/LEDTA)

称取175.3g氯化钠、27.68g磷酸二氢钠、7.4g EDTA,溶于约800mL的蒸馏水中,用10mmol/L的氢氧化钠溶液(约6.5mL)调pH值至7.4,再加蒸馏水定容至1 000mL,分装后高温高压灭菌。

26.100×Denhardt’s溶液(www.daowen.com)

水溶液聚蔗糖(Ficoll)10g

聚乙烯吡咯烷酮(PVP)10g

牛血清白蛋白(BSA)10g

加去离子水定容至500mL,高温高压灭菌后分装,-20℃保存。

27.T-DNA溶液

称取100mg小牛胸腺DNA溶于10mL去离子水中,用带针头的注射器反复抽吸,沸水浴中10min后,冰浴速冷,-20℃保存备用。使用前沸水浴10min,冰浴速冷。

28.预杂交液(用于原位杂交)

6×SSC3mL 20×SSC

5×Denhardt’s溶液10mL50×Denhardt’s溶液

T-DNA1mL10mg/mLT-DNA溶液

0.1%SDS 1mL10%SDS

10mmol/LTris-HCl 1mL1mol/LTris-HCl,pH7.4

加去离子水定容至100mL。

29.杂交液(用于原位杂交)

6×SSC3mL20×SSC

5×Denhardt’s溶液1mL50×Denhardt’s溶液

0.5%SDS0.05mL10%SDS

32P探针标记50μL

加去离子水定容至10mL。

30.预杂交液(用于Southern blot)

20×SSPE2.5mL

100×Denhardt’s溶液0.5mL

100%去离子甲酰胺5.0mL

10mg/mLssDNA1.0mL

10%甘氨酸1.0mL

31.杂交液(用于Southern blot)

20×SSPE2.5mL

100×Denhardt’s溶液0.2mL

100%去离子甲酰胺5.0mL

10%SDS0.3mL

50%硫酸葡聚糖钠2.0mL

32.CPW溶液

CaCl2·2H2O1480.0mg

KNO3101.0mg

KH2PO427.2mg

MgSO4·7H2O246.0mg

CuSO4·5H2O0.025mg

KI0.16mg

加去离子水定容至1 000mL,pH5.8。

33.盐酸离析液(1mol/LHCl)

量取82.5mL浓盐酸(相对密度1.19),加入足量蒸馏水中并定容至1 000mL。

34.盐酸乙醇解离液

在1份95%乙醇中边搅拌边慢慢加入1份浓盐酸,混匀。

35.常用固定液

36.漂洗液

量取5mL10%偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)和5mL1mol/L盐酸,依次加入90mL蒸馏水中,混匀。

37.洗涤液的配制

配制过程:先将重铬酸钾溶于水(若不能完全溶解,可利用稍后加入浓硫酸时的产热助其溶解),然后缓慢加入浓硫酸,同时缓慢搅拌,若容器温度太高,可停止加入浓硫酸,待降温后继续缓慢加入。配好后盛于密封的玻璃容器中。

需特别注意的是,浓硫酸的加入会产生大量的热,因此应选择塑料或陶瓷制品配制洗涤液,以防玻璃器皿遇热破裂。同时配制过程需戴耐酸手套,保护眼睛和身体裸露部分,避免灼伤。

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