遗传学实验用培养基或试剂都需要灭菌。一般培养基在0.105 MPa(121℃)条件下灭菌20min;溶液类(如盐溶液、EDTA溶液等)应在0.055 MPa(111℃)下灭菌30min,或在0.07 MPa(115℃)下灭菌20min;葡萄糖、氨基酸、生物素等物质则在0.055 MPa(111℃)下灭菌20min,而生物活性物质如抗生素、酶溶液以及动物细胞培养基(如RPMI 1640)等则不能用高温高压法灭菌,通常用已灭菌的孔径是0.22μm或0.45μm 的滤膜,在无菌条件下过滤灭菌。
1.LB液体培养基(L-肉汤液体培养基)
胰蛋白胨 10.0g
酵母提取物 5.0g
氯化钠 10.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
上述各成分完全溶解后,用5mol/LNaOH调pH至7.2,灭菌。
2.LB固体培养基
LB液体培养基 1 000mL
琼脂粉 15.0g
3.SOB液体培养基
胰蛋白胨 20.0g
酵母提取物 5.0g
NaCl 5.0g
250mmol/LKCl 10.0mL
2mmol/LMgCl2 5.0mL
去离子水定容至 1 000mL
上述各成分完全溶解后,用5mol/LNaOH调pH至7.0,灭菌。
4.SOC液体培养基
SOB液体培养基 980mL
1mol/L葡萄糖(过滤灭菌) 20.0mL
总体积1 000mL,混匀后分装,-20℃保存。
1mol/L葡萄糖的配制方法:称取18g葡萄糖溶于100mL去离子水中,用无菌的0.22μm滤膜过滤除菌。
5.CB液体培养基
蛋白胨 10.0g
牛肉浸膏 10.0g
NaCl 5.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0~7.2。
6.淀粉培养基
蛋白胨 10.0g
牛肉浸膏 5.0g
NaCl 5.0g
可溶性淀粉 2.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
7.营养肉汤液体培养基(NA培养基)
蛋白胨 5.0g
牛肉浸膏 3.0g
NaCl 5.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
8.Z-肉汤液体培养基
蛋白胨 20.0g
牛肉浸膏 6.0g
葡萄糖 2.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
用5mol/LNaOH调pH至7.5。
9.YT液体培养基
胰蛋白胨 8.0g
酵母浸膏 5.0g
NaCl 5.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
10.YPD液体培养基
蛋白胨 20.0g
酵母浸膏 10.0g
葡萄糖 20.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
因为YPD 培养基是色氨酸限制型培养基,所以在灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每1 000mL培养基中需添加1.6g色氨酸;如需配制平板,在灭菌之前加入20g琼脂粉。
11.YEB液体培养基
蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 1.0g
牛肉浸膏 5.0g
MgSO4·7H2O 0.493g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
12.YEB固体培养基
YEB液体培养基 1 000mL
琼脂粉 15.0g
13.伊红美蓝(EMB)固体培养基
蛋白胨(胰蛋白胨) 8.0g(www.daowen.com)
蔗糖 10.0g
NaCl 5.0g
K2HPO4 2.0g
伊红Y(曙红) 0.4g
美蓝 0.065g
琼脂粉 15.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
在加入伊红Y 和美蓝之前调pH至7.2。
14.YEP液体培养基
蛋白胨 10.0g
酵母浸膏 10.0g
牛肉浸膏 5.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
15.YEPD液体培养基
蛋白胨 20.0g
酵母粉 10.0g
葡萄糖 20.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
16.YEPDS液体培养基
YEPD液体培养基中加入山梨醇至终浓度 0.8mol/L。
17.液体完全培养基(CM)
蛋白胨 10.0g
酵母浸膏 10.0g
葡萄糖 20.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH6.0。
18.基本固体培养基(MM)
10×A缓冲液100mL
20%蔗糖20mL
1mg/mLVB(1盐酸硫胺素) 4mL
0.25mol/LMgSO4·7H2O 4mL
琼脂粉 17g
蒸馏水定容至 1 000mL
高温高压灭菌后,冷却至50℃左右再补加下列组分:
各种氨基酸(10mg/mL) 4mL
链霉素(50mg/mL) 4mL
卡那霉素(5mg/mL) 4mL
利福平(25mg/mL) 4mL
注:配制利福平时,先用少许甲醇溶解,再加入无菌水定容至所需的量。
19.10×A缓冲液
K2HPO4 105g
KH2PO4 45.0g
(NH4)2SO4 10.0g
柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O) 10.0g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
20.MG液体培养基
KH2PO4 0.5g
甘露醇 10.0g
谷氨酸钠 2.32g
生物素 0.0002g
蒸馏水定容至 1 000mL
pH7.0。
21.MGL液体培养基
蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
NaCl 5.0g
MgSO4·7H2O 0.1g
KH2PO4 0.25g
甘露醇 5.0g
甘氨酸钠 1.16g
生物素 0.001g
蒸馏水定容至 1 000mL
22.λ噬菌体原种保存稀释液(SM)
NaCl 5.8g
MgSO4·7H2O 2.0g
1mol/LTris-HC(lpH7.5) 50mL
2%明胶溶液 5.0mL
蒸馏水定容至 1 000mL
高温高压灭菌后,室温保存。
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