理论教育 遗传学实验教程:常见微生物培养基配制指南

遗传学实验教程:常见微生物培养基配制指南

时间:2023-11-01 理论教育 版权反馈
【摘要】:遗传学实验用培养基或试剂都需要灭菌。

遗传学实验教程:常见微生物培养基配制指南

遗传学实验用培养基或试剂都需要灭菌。一般培养基在0.105 MPa(121℃)条件下灭菌20min;溶液类(如盐溶液、EDTA溶液等)应在0.055 MPa(111℃)下灭菌30min,或在0.07 MPa(115℃)下灭菌20min;葡萄糖、氨基酸、生物素等物质则在0.055 MPa(111℃)下灭菌20min,而生物活性物质如抗生素、酶溶液以及动物细胞培养基(如RPMI 1640)等则不能用高温高压法灭菌,通常用已灭菌的孔径是0.22μm或0.45μm 的滤膜,在无菌条件下过滤灭菌。

1.LB液体培养基(L-肉汤液体培养基)

蛋白胨        10.0g

酵母提取物       5.0g

氯化钠        10.0g

蒸馏水定容至      1 000mL

上述各成分完全溶解后,用5mol/LNaOH调pH至7.2,灭菌。

2.LB固体培养基

LB液体培养基     1 000mL

琼脂粉        15.0g

3.SOB液体培养基

胰蛋白胨       20.0g

酵母提取物       5.0g

NaCl         5.0g

250mmol/LKCl    10.0mL

2mmol/LMgCl2   5.0mL

去离子水定容至      1 000mL

上述各成分完全溶解后,用5mol/LNaOH调pH至7.0,灭菌。

4.SOC液体培养基

SOB液体培养基     980mL

1mol/L葡萄糖(过滤灭菌)   20.0mL

总体积1 000mL,混匀后分装,-20℃保存。

1mol/L葡萄糖的配制方法:称取18g葡萄糖溶于100mL去离子水中,用无菌的0.22μm滤膜过滤除菌。

5.CB液体培养基

蛋白胨    10.0g

牛肉浸膏   10.0g

NaCl     5.0g

蒸馏水定容至  1 000mL

pH7.0~7.2。

6.淀粉培养基

蛋白胨     10.0g

牛肉浸膏    5.0g

NaCl      5.0g

可溶性淀粉    2.0g

蒸馏水定容至   1 000mL

pH7.0。

7.营养肉汤液体培养基(NA培养基)

蛋白胨          5.0g

牛肉浸膏         3.0g

NaCl           5.0g

蒸馏水定容至       1 000mL

pH7.0。

8.Z-肉汤液体培养基

蛋白胨           20.0g

牛肉浸膏          6.0g

葡萄糖           2.0g

蒸馏水定容至        1 000mL

用5mol/LNaOH调pH至7.5。

9.YT液体培养基

胰蛋白胨         8.0g

酵母浸膏         5.0g

NaCl           5.0g

蒸馏水定容至       1 000mL

pH7.0。

10.YPD液体培养基

蛋白胨        20.0g

酵母浸膏       10.0g

葡萄糖         20.0g

蒸馏水定容至   1 000mL

因为YPD 培养基是色氨酸限制型培养基,所以在灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每1 000mL培养基中需添加1.6g色氨酸;如需配制平板,在灭菌之前加入20g琼脂粉。

11.YEB液体培养基

蛋白胨      5.0g

酵母浸膏     1.0g

牛肉浸膏     5.0g

MgSO4·7H2O  0.493g

蒸馏水定容至    1 000mL

pH7.0。

12.YEB固体培养基

YEB液体培养基    1 000mL

琼脂粉        15.0g

13.伊红美蓝(EMB)固体培养基

蛋白胨(胰蛋白胨)   8.0g(www.daowen.com)

蔗糖          10.0g

NaCl          5.0g

K2HPO4  2.0g

伊红Y(曙红)    0.4g

美蓝         0.065g

琼脂粉        15.0g

蒸馏水定容至     1 000mL

在加入伊红Y 和美蓝之前调pH至7.2。

14.YEP液体培养基

蛋白胨      10.0g

酵母浸膏      10.0g

牛肉浸膏      5.0g

蒸馏水定容至     1 000mL

pH7.0。

15.YEPD液体培养基

蛋白胨      20.0g

酵母粉     10.0g

葡萄糖     20.0g

蒸馏水定容至   1 000mL

16.YEPDS液体培养基

YEPD液体培养基中加入山梨醇至终浓度   0.8mol/L。

17.液体完全培养基(CM)

蛋白胨    10.0g

酵母浸膏   10.0g

葡萄糖    20.0g

蒸馏水定容至  1 000mL

pH6.0。

18.基本固体培养基(MM)

10×A缓冲液100mL

20%蔗糖20mL

1mg/mLVB(1盐酸硫胺素)  4mL

0.25mol/LMgSO4·7H2O  4mL

琼脂粉    17g

蒸馏水定容至  1 000mL

高温高压灭菌后,冷却至50℃左右再补加下列组分:

各种氨基酸(10mg/mL)   4mL

链霉素(50mg/mL)     4mL

卡那霉素(5mg/mL)    4mL

利福平(25mg/mL)     4mL

注:配制利福平时,先用少许甲醇溶解,再加入无菌水定容至所需的量。

19.10×A缓冲液

K2HPO4   105g

KH2PO4   45.0g

(NH4)2SO4   10.0g

柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)   10.0g

蒸馏水定容至     1 000mL

pH7.0。

20.MG液体培养基

KH2PO4  0.5g

甘露醇         10.0g

谷氨酸钠        2.32g

生物素         0.0002g

蒸馏水定容至      1 000mL

pH7.0。

21.MGL液体培养基

蛋白胨        5.0g

酵母浸膏       2.5g

NaCl         5.0g

MgSO4·7H2O   0.1g

KH2PO4     0.25g

甘露醇     5.0g

甘氨酸钠    1.16g

生物素     0.001g

蒸馏水定容至   1 000mL

22.λ噬菌体原种保存稀释液(SM)

NaCl     5.8g

MgSO4·7H2O  2.0g

1mol/LTris-HC(lpH7.5)   50mL

2%明胶溶液    5.0mL

蒸馏水定容至   1 000mL

高温高压灭菌后,室温保存。

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