理论教育 遗传学实验教链孢霉培养基制作方法

遗传学实验教链孢霉培养基制作方法

时间:2023-11-01 理论教育 版权反馈
【摘要】:在粗糙链孢霉顺序四分子分析实验中,所用补充培养基是在基本培养基中加入适量的赖氨酸,赖氨酸缺陷型菌株就能良好生长。上述培养基分装试管后,在0.055 MPa条件下灭菌30min,取出趁热摆成斜面,可代替完全培养基使用。如培养缺陷型菌株,需在灭菌前补加相应氨基酸。

遗传学实验教链孢霉培养基制作方法

1.微量元素溶液(基本培养基和杂交培养基用)

柠檬酸·H2O      0.5g

ZnSO4·7H2O   0.5g

Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O    0.1g

CuSO4·5H2O   0.025g

H3BO3    0.005g

Na2MoO4·2H2O    0.005g

MnSO4·4H2O   0.005g

蒸馏水定容至   1 000mL

2.基本培养液

KH2PO4   5.0g

柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)   3.0g

NH4NO3  2.0g

MgSO4·7H2O   0.2g

CaCl2·2H2O   0.1g

10mg/mL生物素溶液   1.0mL

微量元素溶液      1.0mL

蒸馏水定容至      1 000mL

加入2.0%蔗糖和1.5%琼脂粉,就是固体基本培养基。

3.杂交培养基

KH2PO4   1.0g

KNO31.0g

MgSO4·7H2O  0.5g

CaCl2·2H2O    0.1g

NaCl    0.1g

10mg/mL生物素溶液   1.0mL

微量元素溶液   1.0mL

蔗糖         20.0g

琼脂粉       15.0g(www.daowen.com)

蒸馏水定容至     1 000mL

4.完全培养基

基本培养液        1 000mL

酵母浸膏       5.0g

麦芽汁(可不加)   5.0g

酶解酪素        1.0g

维生素混合液(按以下配方配制)  10mL

盐酸硫胺素     0.1g

胆碱        0.1g

肌醇        0.1g

泛酸钙       0.05g

对-氨基苯甲酸    0.005g

烟酰胺       0.005g

盐酸吡哆醇     0.005g

核黄素      0.005g

叶酸       0.001g

蒸馏水定容至   1 000mL

蔗糖       20.0g

琼脂粉     15.0g

用1%甘油代替蔗糖,可获得大量的分生孢子。

5.补充培养基

在基本培养基中补加一种或多种生长物质,如氨基酸、核酸碱基、维生素等。氨基酸的用量一般是在1 000mL基本培养基中加入0.05~0.1g。

在粗糙链孢霉顺序四分子分析实验中,所用补充培养基是在基本培养基中加入适量的赖氨酸,赖氨酸缺陷型菌株就能良好生长。

6.马铃薯培养基

将洗净的马铃薯去皮切碎,称取200g,加入1 000mL蒸馏水中,煮熟并搅拌成糊状,然后用多层纱布过滤,弃去残渣,滤下的汁中加入2%琼脂和2%蔗糖,煮融后分装到试管中。也可将马铃薯切成黄豆大小碎块,每支试管放4~5块,再加入融化的琼脂和蔗糖。

上述培养基分装试管后,在0.055 MPa(111℃)条件下灭菌30min,取出趁热摆成斜面,可代替完全培养基使用。如培养缺陷型菌株,需在灭菌前补加相应氨基酸。

7.玉米杂交培养基

将玉米浸泡软化后破碎,每支试管(φ18mm×180mm)放置3~4粒,加入少量含1%琼脂的蒸馏水,使其浸没玉米粒,然后插入一条折成屏风状的滤纸条(4cm×10cm,插入的一头剪去两个角),加上棉塞或硅胶塞,再高温高压灭菌,不需摆斜面。

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