一、培养基的配制
果蝇的成虫和幼虫是以酵母菌作为主要食料的,所以实验室内凡是能发酵的基质,都可作为果蝇培养基或饲料的原料成分。实验室常用的果蝇培养基有玉米培养基、米粉培养基和香蕉培养基等(附表1-1)。
附表1-1 果蝇培养基配方
1.玉米粉培养基
(1)称取1.5g琼脂粉加入100mL蒸馏水中,加热搅拌煮沸,使其充分溶解,再加入13g白糖搅拌溶解。
(2)另称取17g玉米粉加入100mL蒸馏水中,加热搅拌成糊状,然后加入按(1)方法配制好的混合物,煮沸3~5min,要不断搅拌,以防沉积物烧焦。
(3)待稍降温后加入1.4g酵母粉和1mL丙酸(或溶于95%乙醇的苯甲酸),搅拌调匀后,趁热分装于已灭菌的培养瓶中。
按上述方法,可配制玉米粉培养基约200mL。
2.米粉培养基
配制方法与玉米粉培养基基本相同。
称取2g琼脂粉加入100mL蒸馏水中,加热煮沸溶解后再加入10g白糖、8g米粉(或麸皮),不断搅拌煮沸数分钟。稍降温后加入1.4g酵母粉和1mL丙酸,调匀后趁热分装到培养瓶中。按此方法,可配制米粉培养基约100mL。(www.daowen.com)
3.香蕉培养基
将熟透的香蕉捣碎,制成约50g的香蕉浆,同时称取1.6g琼脂粉加入50mL蒸馏水中煮沸,溶解后加入香蕉浆,继续煮沸3~5min。待混合物稍降温后加入1.4g酵母粉和1mL丙酸,充分调匀后趁热分装于培养瓶中。
若需临时培养果蝇,可以把已熟透且腐烂的香蕉或苹果,去皮后放入培养瓶中直接作为培养基使用。
二、果蝇培养瓶
培养果蝇的培养瓶可用大、中型试管、200mL牛奶瓶或100mL三角瓶等,瓶塞可选用棉塞或硅胶塞。实验室保存原种或做杂交实验以中型试管为宜。在分装培养基前,培养瓶要经过灭菌处理。一般可采用120~150℃干热灭菌1h,也可采用高温高压灭菌(0.105MPa,121℃)30min。分装时应注意勿将培养基粘到瓶口或瓶壁上,每瓶分装1.5~2cm厚为宜,用灭过菌的纱布棉塞或硅胶塞塞好瓶口。培养基冷却后,室温下放置至少1天,待瓶内壁干燥后方可接种(亦可用灭菌的吸水纸或棉球擦干瓶内壁)。
做好的培养基尽量在1周内用完,暂时不用的应置于清洁阴凉处,不宜放冰箱长期保存。在用塑料袋密封的条件下,分装好的培养基可于室温保存1个月。
丙酸的作用是抑制霉菌污染,待培养基煮沸后稍降温再加入,并搅拌调匀。如无酵母粉,也可用酵母液代替,则应在培养基分装到培养瓶中以后,每瓶滴加1~2滴。
根据我们在实验教学中的经验,在果蝇杂交实验中,把以上玉米粉培养基的配方略作改动,配方中的蔗糖用红糖替代,并减少了酵母粉用量(附表1-2),所配制的培养基中培养的果蝇幼虫和成虫的生长状态都很好,果蝇杂交实验结果也很理想,同时很适合于维持果蝇品系。配制方法与上述玉米粉培养基相同。
附表1-2 玉米红糖培养基
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