实验目的

1.了解果蝇两对相对性状的杂交方法。

2.验证并加深理解遗传自由组合定律。

实验原理

自由组合定律又称为独立分配定律（Law of Independent Assortment）或孟德尔第二定律。支配两对（或两对以上）不同性状的等位基因，在杂合状态保持其独立性。配子形成时，各等位基因彼此独立分离，不同对的基因自由组合。在一般情况下，F1配子分离比为1∶1∶1∶1；F2基因型分离比率为（1∶2∶1）2，即（1/4＋2/4＋1/4）2三项式展开式的各项系数；显性完全时，F2表型比率为（3∶1）2，即（3/4＋1/4）2二项式展开式的各项系数（9∶3∶3∶1）。因此可以根据杂交的配子类型及比例、F1代、F2代群体表型类型及比例等对两对（或两对以上）相对性状的分离和组合进行遗传分析。

黑檀体果蝇的体色为乌木色（e），与之相对应的野生型果蝇的体色为灰色（E），灰色对黑檀体为完全显性，控制这对相对性状的基因位于第三号染色体（ⅢR 70.7）上；果蝇另一突变性状残翅（vg），与之对应的野生型性状为长翅（Vg），控制这对相对性状的基因位于第二号染色体（ⅡR 67.0）上，长翅对残翅为完全显性。用具有这两对相对性状的纯合亲本杂交（表2-Ⅱ-1），其性状的遗传行为应符合自由组合定律。

表2-Ⅱ-1　果蝇的双因子遗传分析（灰体-黑檀体，长翅-残翅）

实验用品

1.材料

黑腹果蝇残翅品系（E∥E vg∥vg）、黑檀体品系（e∥e Vg∥Vg）。

2.试剂

同实验二-Ⅰ。

3.器材

同实验二-Ⅰ。

实验操作程序

具体实验操作程序详见实验二-Ⅰ。

1.原种果蝇培养

2.挑选杂交亲本果蝇

3.麻醉接种

(www.daowen.com)

4.去亲本

5.观察杂种F1代

6.培养杂交F2代

7．统计检验。

预期实验结果与分析

1.观察和统计正反交F1代果蝇的表型和个体数，并将正反交的结果（表2-Ⅱ-2）加以比较，分析双因子杂交实验中决定两对相对性状的等位基因间的显隐性关系。

表2-Ⅱ-2　正反交F1代和F2代果蝇体色和翅型观察记录表

2.观察和统计正反交F2代果蝇的表型和个体数，计算不同表型之间的比例，根据实验观察和统计结果做χ2检验（表2-Ⅱ-3）。

表2-Ⅱ-3　实验结果χ2检验表

自由度＝n－1　χ2＝∑（O－E）2/E

要点及注意事项

如果在杂种F1代中就出现性状分离，如残翅或黑檀体果蝇，表明杂交亲本的选择已出现误差。

作业与思考题

1.基因间发生自由组合的前提是什么？

2.如果分别针对F2代的雌性和雄性个体进行统计分析，自由组合定律的验证结论是否会有所不同？

3.假设实验所得F2代群体总数为100，1 000，10 000，其χ2检验的结果会有所不同吗？

4．如果χ2检验结果表明实验观察数与预期数差异显著，不符合自由组合定律，分析其可能原因。