理论教育 宽带果实蝇分子鉴定研究成果

宽带果实蝇分子鉴定研究成果

时间:2023-10-29 理论教育 版权反馈
【摘要】:目前针对宽带果实蝇的研究几乎全部集中于种类分子鉴定方面:2000年,Mun等利用限制性内切酶ApaI,NheI和SacI将宽带果实蝇和南瓜实蝇、橘小实蝇以及地中海实蝇区分开来,以便于对实蝇快速进行检疫。对这6种实蝇72个个体mtDNA Cytb基因中段420 bp的碱基序列进行分析,得到38种单倍型,发现了116个变异位点,其中30个位点较为稳定。引物OPC-01、OPI-17、OPL-07、OPL-08以及OPL-16可以用于宽带果实蝇的分类鉴定。

宽带果实蝇分子鉴定研究成果

通过分子标记快速区分实蝇种类以及深入分析实蝇种群遗传特征及扩散历史是外来实蝇分子生物学研究领域的两个重要方向(李志红,2013;Xiaofei, 2010;Daojian, 2005;Xuanwu,2012)。目前针对宽带果实蝇的研究几乎全部集中于种类分子鉴定方面:

2000年,Mun等利用限制性内切酶ApaI,NheI和SacI将宽带果实蝇和南瓜实蝇、橘小实蝇以及地中海实蝇区分开来,以便于对实蝇快速进行检疫(Mun, 2000)。

2004年张红梅等利用RAPD技术对陕西省常见4种实蝇的基因组DNA的多态性进行初步研究,筛选出5种引物S61、S107、S126、S275、S1142,可以对4个种扩增出稳定清晰的多态性片段,其中引物S126可以把南亚果实蝇和宽带果实蝇、宽带果实蝇和三点棍腹实蝇Dacus trimacula分开(Miyoshi, 1978)。后又筛选出S361、S67和S252可以对南瓜实蝇、宽带果实蝇和三点棍腹实蝇进行区别鉴定;S112引物可以对宽带果实蝇、橘大实蝇和三点棍腹实蝇进行区别鉴定;S126和S134可以对宽带果实蝇和三点棍腹实蝇进行区别鉴定(Hongmei,2004)。

2005年,余道坚研究了包括宽带果实蝇在内的2属10 亚属28种检疫性实蝇mtDNA cox1基因部分序列,通过开发特异性引物实现了对宽带果实蝇的快速鉴定(Daojian,2005)。

吴佳教等应用PCR-RFLP技术,对中国口岸截获频率较高的橘小实蝇、番石榴实蝇、辣椒实蝇Bactrocera latifrons、昆士兰实蝇、锈实蝇Bactrocera rubiginus、瓜实蝇、南亚果实蝇、宽带果实蝇、地中海实蝇9种检疫性实蝇开展了快速鉴定方法的研究,采用限制性内切酶MSE1和DRAI对PCR扩增产物进行酶切,得到的酶切位点可将宽带果实蝇与其他9种实蝇区分开来。该方法不受供试实蝇地理来源及食物源的影响,在口岸截获实蝇的快速检疫鉴定中有较强的实用价值(吴佳教等,2005)。

朱振华等首次对果实蝇属的橘小实蝇、瓜实蝇、南亚果实蝇、番石榴实蝇、宽带果实蝇、黑漆实蝇Bactrocera scutellaris 6种实蝇线粒体基因进行了测序。对这6种实蝇72个个体mtDNA Cytb基因中段420 bp的碱基序列进行分析,得到38种单倍型,发现了116个变异位点,其中30个位点较为稳定。对这6种实蝇与其各自鉴别位点的对应关系研究表明,mtDNA Cytb基因可以作为这6种实蝇种类鉴别的分子标记(朱振华等,2005)。(www.daowen.com)

2006年,唐侃从62对微卫星引物中筛选出可用于鉴定区分4亚属9种检疫性实蝇的26对微卫星引物。并采用微卫星位点扩增情况0/1的组合进行实蝇鉴定。结果表明,最少只需要两对引物(33F-34R,51F-52R)1次PCR与电泳反应就可鉴定出宽带果实蝇(Kan, 2006)。

詹开瑞利用PCR结合DGGE的技术对宽带果实蝇与其他常见种类(辣椒实蝇、南亚果实蝇、侧条实蝇、橘小实蝇、瓜实蝇)进行了鉴别。结果显示:通过DGGE,可以区分不同种类的cox2和16S rDNA基因序列。根据每一种实蝇cox2和16S rDNA基因所在的特定位置,确定该种的特异性,表明这一方法可以初步用于种群的区分和鉴定(Kai,2006)。

2007年,张亮和张智英采用RAPD技术构建了南亚果实蝇、黑漆实蝇、宽带果实蝇、瓜实蝇、橘小实蝇和番石榴实蝇6种实蝇的指纹图谱。从131个引物中筛选出5个重复性好、多态性高的引物,共扩增出302条谱带,其中111条谱带具有遗传多态性。引物OPC-01、OPI-17、OPL-07、OPL-08以及OPL-16可以用于宽带果实蝇的分类鉴定(张亮等,2007)。

2009年,姚廷山等采用改进的CTAB法提取单头实蝇的基因组DNA,从20对引物中筛选出2对重复性好、多态性高的引物,运用微卫星标记(SSR)技术,初步构建了宽带果实蝇和重庆市常见南亚果实蝇、橘小实蝇、瓜实蝇、黑颜果实蝇B.diaphora 5种实蝇的指纹图谱。通过这些图谱可容易区分宽带果实蝇与重庆市常见的其余4种检疫性实蝇(姚廷山等,2009)。

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