水中混杂地生长着很多细菌，在微生物中，把要研究的某一细菌分离出来，这一过程叫做“分离”；把通过一个细胞分裂得到后代的过程叫做“纯化培养”。细菌的分离和纯化的方法很多，常用的有平板稀释分离法（混均法或涂布法）、平板划线分离法、单细胞挑取分离法、培养条件控制法等，利用这些方法使细菌单个细胞或同一类细胞在培养基上形成菌落，挑取单个菌落于斜面培养基上培养，然后从斜面培养基的菌苔挑出少许进行划线分离，获得单一菌落，经过反复多次后，便可获得菌落形态及菌体形态一致的细菌，供鉴定用。

1.细菌的分离 首先将所采集的样品（水样、泥样或生物膜）10mL（或10g）接入事先已灭菌、内装玻璃珠和90mL无菌水的三角瓶中，使细菌呈单细胞状态分散于水中，然后进行倍比稀释（10倍稀释法），将样品稀释成不同的稀释度。一般来说，轻度污染的水稀释至10^-6～10^-4即可，电镀废水的稀释度可高一些，其目的是为了得到更多的单一菌落。最后，按平板计数的方法采用混均法或涂布法进行培养以得到单一的菌落。分离细菌的过程如图17-22所示。

图17-22 分离细菌的过程

2.细菌的纯化 根据平板分离得到的菌落，进行菌落形态特征的观察，找出不同形态特征的菌落，用接种环挑取单菌落，接种到斜面培养基上进行培养，整个过程均需要无菌操作。(www.daowen.com)

在挑取单菌落时应注意：确定适当的培养条件和时间，选择单独的菌落，接种时应在菌落边缘挑取少量菌苔移入斜面，尽量不要带入原来的基质。将斜面培养的菌落再进一步纯化，其方法有稀释平板法和平板划线法，平板划线法应用最为普遍，如图17-23所示。

整个操作过程如下：首先从斜面培养基上挑取少量生长的菌，然后在事先制好的平板上划线（注意不要划破琼脂表面），划线时要在所划的范围内尽量划满，然后将接种环灼烧，再转动一定的角度连接已划线的区域再划另一区，最后划满整个平皿，培养后得单菌落，将单菌落转接到斜面上，如此反复几次后便可获得纯菌株，留作细菌鉴定用。至于采用上述哪种方法，根据操作者而定。

图17-23 平板划线法