1.液体石蜡法

（1）采用斜面保藏法和穿刺培养法相同的方法获得健壮的培养物。

图17-21 冷冻干燥安瓿管处理方法

（2）将灭菌液体石蜡注入每一斜面（或穿刺试管）中，使液面高出斜面顶部1cm左右，使用的液体石腊要求化学纯即可。

（3）将注入石腊的培养物置试管架上，以直立状态放在4℃下保存。

2.甘油管法

（1）首先将甘油配制成体积分数为80%的溶液。

（2）将体积分数为80%的甘油按1mL/瓶的量分装到一甘油瓶（3mL规格）中，在121℃下灭菌。

（3）将要保藏的菌种培养成新鲜的斜面（也可用液体培养基振荡培养成菌悬液）。

（4）在培养好的斜面中注入少许（2～3mL）的无菌水，刮下斜面振荡，使细胞充分分散成均匀的悬浮液，并且细胞浓度约为10⁸～10¹⁰个/mL。(www.daowen.com)

（5）将菌悬液吸取1mL于上述装好甘油的无菌甘油瓶中，充分混匀后，使甘油总体积分数为40%，然后置于-20℃下保存（液体培养的菌液到对数期直接吸收1mL于甘油瓶中）。

3.沙土管保藏法

（1）取河沙若干，用24目筛子过筛，用体积分数为10%的盐酸浸泡24h，然后倒去盐酸。用水泡洗数次到中性为止，然后去水，将沙烘干。

（2）取菜园（果园）土壤，风干、粉碎、过筛（24目筛）。

（3）把烘干的沙和土按一定的比例（如3∶2）混合后装入小指形管中，装入量约高1cm左右，塞好棉塞，在121℃下灭菌1h，然后烘干，亦可于170℃下干热灭菌2h。

（4）将保藏的菌种接种入新鲜斜面，在适宜的温度下获得对数期培养物。

（5）在斜面培养物中注入3～4mL无菌水，用接种环刮下菌苔，振荡均匀后，吸0.2mL左右的菌液于沙土管中，再用接种针将沙土和菌液搅拌均匀，若是产孢子的微生物也可以直接用接种针将孢子拌入沙土中。

（6）将混合后的沙土管放于真空泵中抽干以除去沙土管中的水分。

（7）将抽干后的沙土管放干燥器中保存，干燥器下面应盛有硅胶、石灰或五氧化二磷等物，隔一段时间应更换一次干燥器下层的物质，以保持干燥。