1.原理 细菌菌落总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所得的细菌菌落总数除说明该饮用水被生活废弃物污染的程度外，还指示该饮用水是否适合饮用。但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源，因此，结合水中的肠菌群来判断水的污染程度更为全面。

我国现行生活饮用水卫生标准（GB5749—2006）规定：1mL自来水中的细菌菌落总数不得超过100个。

水中细菌种类很多，每种细菌都有其各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来，这在实际工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的基础培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。

2.仪器和材料

（1）无菌移液管（10mL、1mL），试管、培养皿、锥形瓶若干。

（2）电炉、酒精灯、试管架等。

3.内容与操作方法

（1）生活饮用水。以无菌操作方法，用无菌移液管吸取1mL充分混匀的水样注入无菌培养皿中，倾注入约10mL已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，平放于桌上迅速旋转摇培养皿，使水样与培养基充分混匀，冷凝后成为平板。另取一个无菌培养皿倒入培养基冷凝成平板做空白对照。将以上所有平板倒置于37℃恒温箱内培养24h后，记录菌落数。

（2）水源水

1）稀释水样。在无菌操作条件下，以10倍稀释法稀释水样，视水体污染程度确定稀释倍数。取在平板上能长出30～300个菌落的该种水样的稀释倍数。

2）接种。用无菌移液管吸取三个适宜浓度的稀释液1mL（0.5mL）加入无菌培养皿内，注入约15mL已融化并冷却至50℃左右的营养琼脂培养基，平放于桌上迅速旋转摇培养皿，使水样与培养基充分混匀，冷凝后成平板，将以上所有平板倒置于37℃恒温箱内培养24h后，记录菌落数。

接种操作示意图如图17-19所示。

图17-19 接种操作示意图

平板培养基的制作如图17-20所示。

图17-20 平板培养基的制作(www.daowen.com)

4.菌落计数及报告方法 用肉眼观察，计算平板上的细菌菌落数，也可用放大镜和菌落计数器计数。各种不同情况的计算方法如下：

（1）首先选择平均菌落数在30～300之间者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数报告（表17-6中的例次1）。

（2）若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者的菌落总数的比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（表17-6中的例次2、3）。

（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（表17-6中的例次4）。

（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告（表17-6中的例次5）。

（5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告（表17-6中的例次6）。

（6）在求同稀释度菌落数的平均数时，若其中一个平板上有较大片状菌落生长，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约为平板的一半，而另一半平板上菌落数分布很均匀，则可按半平板上的菌落计数，然后乘以2作为整个平板的菌落数。

（7）菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时采用两位有效数字，在两位有效数字后面的位数，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，可用10的指数来表示（表报告方式栏）。在报告菌落数“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。稀释度选择及菌落总数报告方式如表17-6所示。

表17-6 稀释度选择及菌落总数报告方式

（8）注意事项

1）细菌稀释时悬浮液应尽量摇匀，悬浮液的稀释不能过浓或过稀。

2）整个操作过程要求执行严格的无菌操作，时间尽量短。

3）第一次检查结果时，以培养24h为宜。

4）将菌液滴在培养皿的中央，倒入培养基后立即轻轻摇匀，使培养基布满整个培养皿底，以利于孢子的均匀分布。