1.斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法，具体操作如下：

（1）贴标签。接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，贴在距试管口约2～3cm的位置（若用记号笔标记则不需标签）。

（2）点燃酒精灯。

（3）接种。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上，操作必须按无菌操作法进行，简述如下：

1）手持试管。将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在手中，使中指位于两试管之间部位，斜面面向操作者，并使它们位于水平位置，菌种管和待接试管在左手中的拿法如图17-7所示。

2）旋动管塞。先用右手松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。

3）取接种环。右手拿接种环（像握钢笔一样），在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。

图17-7 菌种管和待接试管在左手中的拿法

4）拔管塞。用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧得过烫），如图17-8a所示。

5）接种环冷却。将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分使其冷却。

6）取菌。待接种环冷却后，轻轻蘸取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰，如图17-8b所示。

7）接种。在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管，从斜面培养基的底部向上作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基，有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直接接种可观察不同菌种的生长特点，如图17-9所示。

图17-8 试管拔塞后过火灭菌和取菌

8）塞管塞。取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。

9）将接种环灼烧灭菌，放下接种环，再将棉花塞旋紧。

2.液体接种技术

（1）用斜面菌种接种液体培养基时，有下面两种情况：

1）如接种量小，可用接种环取少量菌体移入培养基容器（试管或三角瓶等）中，将接种环在液体表面振荡或在器壁上轻轻摩擦把菌苔散开，抽出接种环，塞好棉塞，再将液体摇动，菌体即均匀分布在液体中。

2）如接种量大，可先在斜面菌种管中注入定量无菌水，用接种环把菌苔刮下研开，再把菌悬液倒入液体培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。

（2）用液体培养物接种液体培养基时，可根据具体情况采用以下不同的方法：用无菌的吸管或移液管吸取菌种接种，直接把液体培养物移入液体培养基中接种，利用高压无菌空气，通过特制的移液装置，把液体培养物注入液体培养基中接种；利用压力差将液体培养物接入液体培养基中接种。(www.daowen.com)

图17-9 接种

a）斜面划线法 b）和不同细菌直线接种长出的菌苔形态

3.固体接种技术 固体接种最普遍的形式是接种固体曲料，因所用菌种或种子菌来源不同，可分为以下两种：

（1）用菌液接种固体料。包括用菌苔制成的悬液和直接培养的种子发酵液，接种时可按无菌操作法将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀，注意接种所用的菌液量要计算在固体料总加水量之内，否则往往在用液体种子菌接种后曲料含水量加大，影响培养效果。

（2）用固体种子接种固体料。包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌，直接把接种材料混入灭菌的固体料，接种后必须充分搅拌，使之混合均匀，一般先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。

4.穿刺接种技术 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体，并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养，具体操作如下：

（1）贴标签。

（2）点燃酒精灯。

（3）穿刺接种，方法如下：

1）手持试管，旋松棉塞。

2）右手拿接种针在火焰上将针端灼烧灭菌，接着把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌。

3）用右手的小拇指和手掌边拔出棉塞，接种针先在培养基部分冷却，再用接种针的针尖蘸取少量菌种。

4）接种有两种手持操作法：一种是水平法，它类似于斜面接种法；另一种是垂直法，如图17-10所示。

尽管穿刺时手持方法不同，但穿刺时所用的接种针都必须挺直，将接种针自培养基中心垂直地刺入培养基中，穿刺时要做到手稳、动作轻巧快速，并且要将接种针穿刺到接近试管的底部，然后沿着接种针将针拔出，最后塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。

（4）将接种过的试管直立于试管架上，放在37℃或28℃恒温箱中培养，24h后观察结果（注意：若是具有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散，反之则细而密）。

图17-10 垂直法穿刺接种