1.无菌室的准备 在微生物实验中，一般小规模的接种操作，使用无菌接种箱或超净工作台；工作量大时，使用无菌室接种；要求严格时，在无菌室内再结合使用超净工作台。

（1）无菌室的里外两间，均应安装日光灯和紫外线灯，紫外线灯常用规格为30W，吊装在经常工作位置的上方，距地高度为2.0～2.2m。

（2）缓冲间内应安排工作台，供放置工作服、鞋、帽、口罩、消毒用药物、手持式喷雾器等，并备有废物桶等。

（3）无菌室内应备有接种用的常用器具，如酒精灯、接种环、接种针、不锈钢刀、剪刀、镊子、酒精棉球瓶、记号笔等。

2.无菌室的灭菌

（1）熏蒸。先将室内打扫干净，打开进气孔和排气窗通风干燥后重新关闭，进行熏蒸灭菌，常用的灭菌药剂为福尔马林[含37%～40%（质量分数）甲醛的水溶液]，按2～6mL/m³的标准计算用量，盛于铁制容器中，利用电炉或酒精灯直接加热，或加半量高锰酸钾，通过氧化作用加热，使福尔马林蒸发，熏蒸后应保持密闭12h以上。由于甲醛气体具有较强的刺激作用，所以在使用无菌室前1～2h在一搪瓷盘内加入与所用甲醛溶液等量的氨水，放入无菌室，使其挥发中和甲醛，以减轻刺激作用。除甲醛外，也可用乳酸、硫磺等进行熏蒸灭菌。(www.daowen.com)

（2）紫外线灯照射。在每次工作前后，均应打开紫外线灯，分别照射30min进行灭菌。在无菌室内工作时，切记要关闭紫外线灯。

（3）石炭酸溶液喷雾。每次临操作前，用手持喷雾器喷质量分数为5%的石炭酸溶液，主要喷于台面和地面，兼有灭菌和防止微尘飞扬的作用。

3.无菌室空气污染情况的检验 为了检验无菌室灭菌的效果，以及在操作过程中空气污染的程度，需要定期在无菌室内进行空气中杂菌的检验，一般可在两个时间进行：一是在灭菌后使用前，一是在操作完毕后。

取牛肉膏蛋白胨琼脂和马铃薯糖琼脂两种培养基的平板各3个，在无菌室使用前（或使用后）揭开，放置在台面上，半小时后重新盖好；另有一份不打开的作对照，一并放在30℃下培养，48h后检验有无杂菌生长以及杂菌数量的多少，根据检验结果确定应采取的措施。