配制培养基的流程如下：

原料称量→溶解→（加琼脂熔化）→调节pH值→分装→塞棉塞和包扎→灭菌。

1.原料称量、溶解 根据培养基配方，准确称取各种原料成分，在容器中加所需水量的一半，然后依次将各种原料加入水中，用玻璃棒搅拌使之溶解，某些不易溶解的原料如蛋白胨、牛肉膏等可事先在小容器中加少些水，加热溶解后再加入容器中。有些原料需用量很少，不易称量，可先配成高浓度的溶液按比例换算后再冲入容器中，待原料全部放入容器后，加热使其充分溶解，并补足需要的全部水分，即生成液体培养基。

配制固体培养基时，预先将琼脂称好洗净（粉状琼脂可直接加入，条状琼脂用剪刀剪成小段，以便熔化），然后将液体培养基煮沸，再把琼脂放入，继续加热至琼脂完全熔化。在加热过程中应注意不断搅拌，以防琼脂沉淀在锅底烧焦，并应控制火力，以免培养基因暴沸而溢出容器。待琼脂完全熔化后，再用热水补足因蒸发而损失的水分。

2.调节pH值 液体培养基配好后，一般要调节至所需的pH值，常用盐酸及氢氧化钠溶液进行调节，调节培养基酸碱度最简单的方法是用精密pH试纸进行测定，用玻璃棒醮少许培养基，点在试纸上进行对比。如pH值偏酸，则加30g/L氢氧化钠溶液，偏碱则加30g/L盐酸溶液。经反复几次调节至所需的pH值，要准确地调节培养基pH值，可用酸度计进行。

固体培养基酸碱度的调节与液体培养基相同，一般在加入琼脂后进行。进行调节时，应注意将培养基温度保持在80℃以上，以防因琼脂凝固影响调节操作。

3.分装 培养基配好后，要根据不同的使用目的，分装到各种不同的容器中。不同用途的培养基，其分装量应视具体情况而定，要做到适量、实用，分装过多、过少或使用容器不当，都会影响随后的工作。培养基是多种营养物质的混合物，大都具有黏性，在分装过程中，应注意不使培养基沾污管口和瓶口，以免污染棉塞，造成杂菌生长。

分装培养基通常使用大漏斗（小容量分装），两种分装装置的下口都连有一段橡皮软管，橡皮管下面再连一小段末端开口处略细的玻璃管，在橡皮管上夹一个弹簧夹，分装时将玻璃管插入试管内，不要触及管壁，松开弹簧夹，注入定量培养基，然后夹紧弹簧夹，止住液体，再抽出试管，仍不要触及管壁或管口。培养基分装如图17-1所示。

图17-1 培养基分装

4.塞棉塞和包扎 培养基分装到各种规格的容器（试管、三角瓶、克氏瓶等）后，应按管口或瓶口的不同大小分别塞以大小适度、松紧适合的棉塞，棉塞的塞法如图17-2所示。(www.daowen.com)

棉塞的作用主要在于阻止外界微生物进入培养基内，防止由此而可能导致的污染，同时还可保证良好的通气性能，使微生物能不断地获得无菌空气。塞棉塞后，试管培养基可若干支扎成一捆，或排放在铁丝筐内。由于棉塞外面容易附着灰尘及杂菌，且灭菌时容易凝结水气，因此，在灭菌前和存放过程中，应用牛皮纸或旧报纸将管口、瓶口或试管筐包起来。

现配现用的培养基和试管无菌水，可使用硅胶橡胶塞或聚丙烯塑料试管帽，培养基制备完毕后，应立即进行高压蒸汽灭菌，如延误时间，会因杂菌繁殖生长，导致培养基变质，而不能使用。若不能立即灭菌，可将培养基暂放于4℃冰箱或冰柜中，但时间也不宜过久。

图17-2 棉塞的塞法

图17-3 斜面摆放法

灭菌后，需做斜面的试管，应趁热及时摆放斜面，斜面摆放法如图17-3所示。

斜面的斜度要适当，使斜面的长度不超过试管长度的二分之一，摆放时，注意不可使培养基沾污棉塞，冷凝过程中勿再移动试管，待斜面完全凝固后，再进行收存。灭菌后的培养基，最好置于28℃保温检查，如发现有杂菌生长，应及时再次灭菌，以保证使用前的培养基处于绝对无菌状态。

培养基一次不宜配制过多，最好是现配现用，因工作需要或一时用不掉的培养基应放在低温、干燥、避光而洁净的地方保存，试管斜面培养基，因灭菌时棉塞受潮，容易引起棉塞和培养基污染，因此新配制的琼脂斜面最好在恒温室放置一段时间，等棉塞上的冷凝水蒸发后再储存备用，装于三角瓶或其他容器的培养基，灭菌前最好用牛皮纸包扎瓶口，以防灰尘落于棉塞或瓶口而引起污染，在存放过程中，不要取下包头纸，以减少水分蒸发。